甜菜堿（Betaine）含量試劑盒說明書

微量法 100T/96S

甜菜堿Betaine含量試劑盒 其他系列

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：

甜菜堿是一種廣泛分布于動植物及微生物體內的季銨型水溶性生物堿，是生物體內dan堿的氧化產物，可以增強免疫力、降血脂、抗氧化、抗腫瘤，并可作為甲基供體，參與促進動物蛋白質和脂肪代謝、增進食欲、緩和應激、調節滲透壓、穩定維生素等多種生物作用，在化工、醫藥、食品添加劑等領域有較廣泛的應用。

測定原理：

甜菜堿在強suan條件下和雷氏鹽發生反應產生沉淀，沉淀用丙酮溶解形成紅色溶液，在 525nm 處有特征吸收峰，測定 525nm 處的吸光值，可計算得樣品的甜菜堿含量。

試劑組成和配制：

試劑一：粉劑×3 瓶，4℃保存；臨用前根據用量配制，每瓶加 20ml 蒸餾水溶解，加 390µl 濃鹽酸調pH 為 1。

試劑二：99%yi醚，自備。取無水yi醚 59.4ml，加入蒸餾水 0.6ml，混勻。試劑三：70%丙酮，自備。（易揮發，根據用量自備，丙酮：蒸餾水=7:3）

自備儀器和用品：

天平、離心機、酶標儀、96 孔板、yi醚、鹽酸、丙酮和蒸餾水。

甜菜堿提取：

取烘干后過 40 目篩的樣品約 0.02g，加 0.8ml 水，置于 60℃提取 30min，期間不斷震蕩。再加入 200µl提取液，混勻后 10000g，25℃，離心 10min，取上清液。

測定步驟：

1、分光光度計預熱 30min 以上，調節波長至 525nm，蒸餾水調零。

2、操作表

充分混勻，4℃中反應 2h，12000rpm，25℃，離心 10min，棄上清

混勻，12000rpm，25℃，離心 10min，棄上清。置于通風櫥使殘余yi醚自然揮發干凈

震蕩使沉淀充分溶解，取 200µl 于 96 孔板，記錄標準管和測定管 525nm 處吸光值A 測定與 A 空白。

ΔA=A 測定管-A 空白管。

注意事項：

1、試劑一配制時pH 嚴格控制為 1，否則會導致反應不wan全，配制后 4℃只能穩定幾個小時，配制后盡快使用。

2、試劑二與試劑三對呼吸道有一定的刺激，請做好防護工作。

甜菜堿含量計算公式：

標準條件下測定的回歸方程為y = 0.502x + 0.0057，R2 = 0.9993；x 為甜菜堿濃度（mg/ml），y 為吸光值。

甜菜堿含量（mg/g 干重）=（ΔA-0.0057）÷ 0.502× V 標準÷(V 樣÷V 樣總×W) =1.99×（ΔA-0.0057）÷W V 標準：標準品體積，0.3ml；V 樣：反應中樣本體積，0.3ml；V 樣總：加入提取液體積，1ml；W：樣本質量，g

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