半胱an酸（cysteine, Cys）含量測定試劑盒說明書

分光光度法 50 管/48 樣

半胱an酸含量測定試劑盒 氨基酸

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：

蛋白質含有三種含硫an基酸：甲硫an酸、胱an酸和Cys。其中，Cys 是唯yi一種含有巰基的含硫an基酸，從甲硫a酸轉化而來，并且可與胱an酸互相轉化。Cys 參與蛋白質二硫鍵的形成，經常是蛋白質活性中心的組成部分，還可以為其它生理生化反應提供巰基。此外，Cys 大量積聚在皮膚和粘膜表面，在角蛋白生成中維持重要的巰基酶的活性，并且補充巰基，以維持皮膚的正常代謝，調節表皮最下層的色素細胞生成的底層黑色素。具有美白、解毒、改善炎癥和過敏性皮膚等作用。

測定原理：

Cys 還原磷鎢酸生成鎢藍，在 600nm 處有吸收峰；通過 600nm 吸光度，計算Cys 含量。

組成：

試劑三用前 1 天，向試劑三中加 5 ml 蒸餾水充分溶解，再加 85％磷酸 1.25ml，混勻后蓋緊（防止水分散失）沸水浴 2h；冷卻后加 20 ml 蒸餾水，4℃可保存 2 周。

標準品臨用前加 10 ml 蒸餾水，充分溶解。1μmol/ml 標準液，4℃避光保存。用不完的試劑 4℃可保存 3 天。

自備儀器和用品：

可見分光光度計、低溫離心機、可調式移液槍、1ml 玻璃比色皿、85％磷酸和蒸餾水。

半胱an酸提取：

液體樣品中半胱an酸提取：取 0.1ml 液體樣品，加試劑一 0.9ml，充分混勻，8000g

4℃離心 10min，取上清液，待測。

組織中半胱an酸提取：按照組織質量（g）：試劑一體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約0.1g組織，加入 1ml 試劑一）進行冰浴勻漿，8000g 4℃離心 10 min，取上清液待測。

細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（104 個）：試劑一體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1ml 試劑一），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）；8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

測定操作：

分光光度計預熱 30 min，調節波長到 600 nm，蒸餾水調零。

空白管：取 1ml 玻璃比色皿，加入 100 μl 蒸餾水，500μl 試劑二，500μl 試劑三，混勻后室溫靜置

15 min，于 600nm 處測定吸光值，記為A 空白管。

標準管：取 1ml 玻璃比色皿，加入 100 μl 標準液，500μl 試劑二，500μl 試劑三，混勻后室溫靜置

15 min，于 600nm 處測定吸光值，記為A 標準管。

測定管：取 1ml 玻璃比色皿，加入 100 μl 上清液，500μl 試劑二，500μl 試劑三，混勻后室溫靜置

15 min，于 600nm 處測定吸光值，記為A 測定管。

注意：空白管和標準管只需要做一次。

計算公式：

按液體樣品的體積計算：

半胱an酸含量（μmol/ml）=[C 標準品×V 標準品×(A 測定管－A 空白管)÷(A 標準管－A 空白管)]×（V樣總÷V 樣）=1×(A 測定管－A 空白管)÷(A 標準管－A 空白管)

按樣本質量計算：

半胱an酸含量（μmol/g 鮮重）=[C 標準品×V 標準品×(A 測定管－A 空白管)÷(A 標準管－A 空白管)]×

（V 樣總÷V 樣）÷W=1×(A 測定管－A 空白管)÷(A 標準管－A 空白管) ÷W

按照蛋白濃度計算：

半胱an酸含量（μmol /mg prot）= [C 標準品×V 標準品×(A 測定管－A 空白管)÷(A 標準管－A 空白管)]÷

（V 樣×Cpr）=1×(A 測定管－A 空白管)÷(A 標準管－A 空白管) ÷Cpr

按細胞數量計算：

氨基酸含量（μmol /104 cell）=[C 標準品×V 標準品×(A 測定管－A 空白管)÷(A 標準管－A 空白管)] ×

（V 樣總÷V 樣×細胞數量）=1×(A 測定管－A 空白管)÷(A 標準管－A 空白管) ÷細胞數量

C 標準品：標準品濃度，1μmol/ml；V 標準品：反應體系中加入標準品體積，0.1 ml；V 樣：反應體系中加入樣品提取液體積，0.1 ml；V 樣總：加入提取液體積，1ml。W：樣品質量，g；Cpr：樣本蛋白濃度， mg/ml。

注意事項：

最di檢出限為 100μmol/L。

半胱an酸含量測定試劑盒 氨基酸