蛋白修飾位點分析實驗原理

先通過IP得到目的蛋白，再通過SDS-PAGE對目的蛋白進行分離純化，將膠條上目的蛋白對應(yīng)的條帶切下進行膠內(nèi)酶解和高靈敏度的液質(zhì)聯(lián)用分析(LC-MS/MS)，通過數(shù)據(jù)庫檢索得到蛋白上的修飾位點。

蛋白分析的應(yīng)用

1. 磷酸化：信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細胞周期、生長發(fā)育及癌癥機理等；

2.糖基化：蛋白質(zhì)折疊、更新以及免疫應(yīng)答等；

3.乙酰化：基因表達調(diào)控、細胞凋亡、細胞代謝、蛋白質(zhì)穩(wěn)定性以及神經(jīng)退行性病變等；

4.泛素化：細胞周期、細胞凋亡、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、DNA修復(fù)以及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等；

5.甲基化：染色質(zhì)結(jié)構(gòu)及轉(zhuǎn)錄調(diào)控等；

6.丙酰化 / 丙二酰化 / 戊二酰化 / 琥珀酰化：主要存在于線粒體和細菌中，與代謝過程密切相關(guān)。

實驗流程

1.IP溶液/膠條；

2.蛋白酶消化；

3.LC-MS/MS分析；

4.搜庫后分析，蛋白鑒定、翻譯后修飾分析。

實驗完成周期及交付標準

1. 周期：6周左右

2. 交付標準：質(zhì)譜原始數(shù)據(jù)、白鑒定列表、肽段信息表、實驗報告（主要儀器、試劑和實驗方法）

需確認的信息

1. 樣品：如果樣品為蛋白質(zhì)溶液，蛋白質(zhì)總量≥300mg; 如果是組織樣品，樣品總量≥0.1g； 如果是細胞樣品，細胞數(shù)量≥107個；如果是體液樣品，血清≥200ml，腦脊液≥200ml，尿液≥1ml，淚液≥1ml；

2. 樣品采集過程中使用到塑料制品時，盡量使用無色進口產(chǎn)品，以減少塑料制品中雜質(zhì)對質(zhì)譜檢測的影響；

3. 確認樣品所屬種屬、分析需求。