Qustions&解答Answers

Seahorse XF 實(shí)驗(yàn)常見(jiàn)問(wèn)題及解答

01可以使用超出保質(zhì)期的探針板或重復(fù)使用探針板嗎？

     Agilent 無(wú)法保證因使用超出保質(zhì)期的探針板或重復(fù)使用探針板而得到的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)質(zhì)量(有效性)，為得到最佳的、最真實(shí)的數(shù)據(jù)，請(qǐng)使用有效期內(nèi)的探針板及其它消耗品。

02探針板水化超出水化時(shí)間怎么辦？

     Agilent建議將探針板放入37℃無(wú)CO2培養(yǎng)箱中水化過(guò)夜以得到*結(jié)果。最短水化時(shí)間是37℃水化12小時(shí)。探針板最長(zhǎng)水化時(shí)間是37℃水化72小時(shí)，但由于液體蒸發(fā)需要補(bǔ)充(或更換)校準(zhǔn)液，因此37℃無(wú)CO2培養(yǎng)箱務(wù)必放置水盤(pán)保證濕度。

03Fluxpak各種探針板有什么區(qū)別？

     探針板是Fluxpak的組成部分，一個(gè)Fluxpak包含探針板、水化板、校準(zhǔn)液和細(xì)胞培養(yǎng)微孔板。以上各消耗品數(shù)量因所購(gòu)Fluxpak類型而不同。探針板不能單獨(dú)訂購(gòu)，必須通過(guò)訂購(gòu)Fluxpak來(lái)購(gòu)買(mǎi)，但細(xì)胞培養(yǎng)板和校準(zhǔn)液可單獨(dú)購(gòu)買(mǎi)。訂購(gòu)前，需要了解使用機(jī)器的型號(hào)及所需要的實(shí)驗(yàn)次數(shù)，訂購(gòu)與之配套的Fluxpak。

04計(jì)劃明天做實(shí)驗(yàn)，我今天要做些啥？

     實(shí)驗(yàn)前一天，打開(kāi)主機(jī)，打開(kāi)電腦，同時(shí)點(diǎn)開(kāi)Wave軟件，確保是Connected的狀態(tài)，水化探針板，貼壁細(xì)胞提前接種到Seahorse的細(xì)胞培養(yǎng)板里。

05探針板水化聽(tīng)說(shuō)有二步，是這樣嗎？

     是的，96孔探針板，實(shí)驗(yàn)前一天，用無(wú)菌水；第二天做實(shí)驗(yàn)前，棄去無(wú)菌水，更換上37℃預(yù)熱好的校準(zhǔn)液，再放置無(wú)CO2恒溫箱孵育1小時(shí)，這樣二步法水化，避免了探針頭上的小氣泡；24機(jī)型探針板一步法水化即可，但是還是建議用之前手動(dòng)排一下氣泡；

06一次實(shí)驗(yàn)可以只使用探針板其中的一部分嗎？

     為了將所有藥物或化合物成功地注入細(xì)胞培養(yǎng)孔中，Agilent建議水化整個(gè)探針板并因需要將相同字母標(biāo)注的全部加藥孔注入藥物（請(qǐng)參考實(shí)驗(yàn)流程中關(guān)于加載藥物的注意事項(xiàng)）。背景孔的加藥孔也必須加上藥物，保證所有的A加藥孔體積一致，B、C、D孔同理，否則會(huì)造成打藥失敗；

07實(shí)驗(yàn)中為何必須設(shè)置背景校正孔？

     背景校正孔被用來(lái)過(guò)濾掉實(shí)驗(yàn)的干擾因素，比如溫度和 buffering capacity，這些干擾因素會(huì)影響氧含量和pH變化（非來(lái)源于代謝變化的影響）。背景校正孔還能被用來(lái)修正整板間溫度波動(dòng)，來(lái)診斷潛在溫度問(wèn)題，以及作為實(shí)驗(yàn)獲得非期望數(shù)據(jù)時(shí)原因篩查的切入點(diǎn)。

08背景校正孔怎么設(shè)置？

      背景校正孔里除了沒(méi)有細(xì)胞，其它所有操作和細(xì)胞孔一致。96機(jī)型背景校正孔（A1,A12, H1, H12，即4個(gè)角）不接種細(xì)胞；24機(jī)型背景校正孔設(shè)置為（A1, B4, C3, D6）；確保背景校正孔中只加入培養(yǎng)液（無(wú)細(xì)胞）

09為何細(xì)胞培養(yǎng)板需要在 37℃無(wú)CO2 培養(yǎng)箱中放置45-60min？

     細(xì)胞培養(yǎng)板在37℃無(wú)CO2培養(yǎng)箱中孵育45-60min的目的是為了脫氣，釋放CO2。

10 Seahorse 實(shí)驗(yàn)時(shí)，我擔(dān)心細(xì)胞量少，我多種點(diǎn)細(xì)胞可以嗎？

     細(xì)胞的密度需要摸索，在實(shí)驗(yàn)上機(jī)前，長(zhǎng)滿板底面積80-90%為最佳，設(shè)置一個(gè)密度梯度，找到最佳的密度；細(xì)胞過(guò)密會(huì)使檢測(cè)時(shí)形成的瞬間微室氧氣快速耗盡。

11 Seahorse 實(shí)驗(yàn)，種細(xì)胞和平時(shí)種細(xì)胞有區(qū)別嗎？

      安捷倫細(xì)胞培養(yǎng)板種細(xì)胞時(shí)候，槍頭抵壁，與水平面呈45°角度加入，加完在超凈臺(tái)靜置1小時(shí)，有助于促進(jìn)細(xì)胞均勻分布并減少邊緣效應(yīng)。96孔細(xì)胞板種80ul；24機(jī)型的板子分二步，先每孔接種100 μL細(xì)胞懸液，培養(yǎng)細(xì)胞1-6小時(shí)，細(xì)胞貼壁后，再補(bǔ)充生長(zhǎng)培養(yǎng)基，每孔加入150μL生長(zhǎng)培養(yǎng)液,總體積為250 μL。加液時(shí)沿壁輕輕加入，避免吹起剛貼壁的細(xì)胞。 

12 使用組織黏附劑處理細(xì)胞培養(yǎng)板會(huì)影響XF實(shí)驗(yàn)測(cè)量嗎？

     不會(huì)。使用諸如poly-L-Lysine，fibronectin，Gelatin，poly-D-lysine，Cell-Tak™等組織黏附劑處理細(xì)胞培養(yǎng)板時(shí)，不會(huì)影響XF儀器測(cè)量的效果及實(shí)驗(yàn)參數(shù)分析。

13 XFp/XFe96細(xì)胞培養(yǎng)微孔板的每個(gè)細(xì)胞孔的最大體積及底面積是多少？

       275 µL；底面積是正常96孔板底面積的40%。

14 XFe24細(xì)胞培養(yǎng)微孔板的每個(gè)細(xì)胞孔的最大體積及底面積是多少？

      1000 µL；底面積和正常96孔板底面積一樣大小。

15 Seahorse XF檢測(cè)液中需要加入抗生素嗎？

      無(wú)需加入抗生素，因?yàn)榇蟛糠?/span>XF實(shí)驗(yàn)在幾小時(shí)內(nèi)就結(jié)束了。