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影響液相色譜分離效果的主要因素有哪些?

閱讀:16183        發(fā)布時(shí)間:2020/10/19
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流動(dòng)相因素

1、流動(dòng)相pH

不同基質(zhì)的填料具有不同的pH適用范圍。常溫下無定形硅膠在純水中的溶解度約為100mg·L-1,且在pH 1~9的范圍內(nèi)溶解的硅膠量幾乎是常量,考慮到溶解速度的影響,對(duì)于硅膠基質(zhì)的填料,其所能承受的流動(dòng)相pH范圍約為1~8。

鍵合相硅膠填料則由于鍵合層的屏蔽作用,使填料對(duì)流動(dòng)相的適應(yīng)范圍大大增加,如現(xiàn)在廣泛使用的反相色譜填料C18 (十八烷基硅烷鍵合硅膠),其pH適用范圍可達(dá)2~10。當(dāng)流動(dòng)相pH值超出酸性范圍時(shí),鍵合相易發(fā)生水解而流失;當(dāng)流動(dòng)相pH超出堿性范圍時(shí),會(huì)加速硅膠的溶解而釋放出絮狀物堵塞柱子,這兩種反應(yīng)均是不可逆反應(yīng),特別是在溫度較高(>40℃)的環(huán)境下,會(huì)使柱效迅速降低而報(bào)廢。

2、流動(dòng)相變質(zhì)

當(dāng)前使用*為廣泛的是硅基鍵合相填料,當(dāng)以水溶液作為流動(dòng)相或流動(dòng)相中含有一定濃度的磷酸鹽緩沖液時(shí),水溶液中或緩沖鹽溶液中會(huì)滋生出一些細(xì)菌或霉菌,從而堵塞固定相顆粒間的空隙。特別是對(duì)于多元自動(dòng)比例混合的高效液相色譜儀來說,水相或緩沖鹽相獨(dú)立存貯,因存放時(shí)間較長而容易發(fā)生此類問題。

3、流動(dòng)相純度 

目前,廣泛使用的填料顆粒粒徑范圍在3~10μm,孔徑在6~10nm,色譜柱在使用中會(huì)有大量的流動(dòng)相通過,如流動(dòng)相含有微量不溶性雜質(zhì)顆粒,則很容易在柱頭部位被截留,久而久之,造成色譜柱機(jī)械性堵塞,引起柱壓升高而無法正常使用。

4、其它因素

如,流動(dòng)相的極性對(duì)柱子也有一定影響,甲醇、水、冰醋酸等極性較大的物質(zhì)會(huì)破壞硅膠填料柱,正丁醇、二氯甲烷等極性小的物質(zhì)會(huì)破壞化學(xué)鍵合硅膠柱,堿性溶液會(huì)破壞陽離子交換樹脂色譜柱,酸性溶液容易損壞陰離子交換樹脂柱。

樣品因素

1、樣品的溶解性 

樣品試樣在配制中,如有少量微粒未能*溶解,則會(huì)隨試樣一起進(jìn)入色譜柱,同樣,會(huì)沉積在柱頭處,造成色譜柱的堵塞。

2、樣品的純度 

樣品中可能含有待分析組分以外的各種組分或雜質(zhì),這些組分或雜質(zhì)可能會(huì)在柱內(nèi)產(chǎn)生不可逆吸附,從而,使固定相的活性點(diǎn)被覆蓋,保留特性發(fā)生變化。

3、樣品的化學(xué)性質(zhì)

待測試樣中的各種組分與填料之間應(yīng)具有化學(xué)穩(wěn)定性,比較典型的是在使用氨基鍵合柱時(shí),應(yīng)避免使用含羰基的化合物和流動(dòng)相,如,丙酮、乙酸乙酯等,以免固定相中的NH2和酐、酮發(fā)發(fā)希夫(Schiff)縮合而使固定相破壞。

其它因素

影響色譜柱壽命的因素很多,除流動(dòng)相和樣品因素外,還有其它一些外在因素,如,柱壓的影響,溫度的影響,色譜柱的正確沖洗,色譜柱的正確安裝等。

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