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羅丹明123染色線粒體膜

時間:2009/4/20閱讀:4297
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羅丹明123染色檢測線粒體膜電位
外觀:紅棕色粉末

化學名:Rh123 羅丹明123

別名: Rhodamine 123; Rh123

分子式:C21H17CLN2O3

分子量:380.82

配制:羅丹明123粉劑用甲醇配成1mg/mlde 儲備液,染色時用DPBS緩沖液將其稀釋為所需濃度

保存:冰箱-20度避光

一、檢測原理:

羅丹明123(Rhodamine 123)是一種可透過細胞膜的陽離子熒光染料,是一種線粒體跨膜電位的指示劑。其在正常細胞中能夠依賴線粒體跨膜電位進入線粒體基質,熒光強度減弱或消失。而在凋亡發生時,線粒體膜完整性破壞,線粒體膜通透性轉運孔開放,引起線粒體跨膜電位(ΔΨm) 的崩潰, Rh123 重新釋放出線粒體, 從而發出強黃綠色熒光,可用熒光顯微鏡、熒光光度計或流式細胞儀檢測,通過熒光信號的強弱來檢測線粒體膜電位的變化和凋亡的發生,可用于培養的細胞或從組織中提取出的線粒體的膜電位檢測。

二、 使用方法:

1.細胞染色及分析

(1)培養細胞1×106/mL重懸于培養基中;

(2)加入羅丹明123染液0.1μg/mL~50 μg/mL (根椐細胞種類不同而濃度不同,一般3~10 μg/mL);

(3)37℃,5% CO2細胞培養箱孵育1~30 min(根椐細胞種類不同而不同,一般10 min);

(4)離心以培養基洗細胞兩次;

2. 組織提取的線粒體染色及分析

(1)按常規方法提取的線粒體,用適量的1×Assays Buffer(將5×Assays Buffer 用水稀釋5倍)重懸;

(2)常規方法進行蛋白含量測定后,用1×Assays Buffer調配成3mg/mL的線粒體溶液;

(3)取2mL 1×Assays Buffer和1mL線粒體溶液;

(4)加入適量待測化合物(同時設空白對照組),250C保溫min;

(5)加入羅丹明123染液10 μL;

(6)熒光光度計檢測:上述混合液全部加入石英比色皿中,置于250C下測定,激發波長488~505nm,發射波長530nm,連續記錄從0 min~30 min內熒光強度的變化。

三、注意事項

1、操作時需戴手套

2、羅丹明123為通透性染料,可以自由進入細胞

3、孵育時,必須避免光照

4、使用時,避免污染母液

5、染色完成后,即刻進行熒光檢測分析

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