培養細菌需要培養基（culture medium），M9和LB培養基是兩種典型的細菌培養基。

      M9是一種確定成分培養基（defined medium），其中的所有成分是可知的。這種培養基包含的無機營養成分（inorganic nutrients)的混合物為細菌的生長提供基本元素，如氮，鎂和鈣，葡萄糖(glucose)提供碳源和能量。在實際應用中，還必須向M9中添加額外的生長因子，如微量元素和維生素。需要添加何種成分要視情況而定。
      Luria-Bertani（LB）培養基是一種不確定成分培養基(undefined medium)，胰蛋白胨(tryptone)負責提供氨基酸以及小的肽段，酵母提取物(yeast extract)負責提供氮源、糖以及其他有機和無機營養。類似LB的混合培養基不需要補充其他的營養成分，并且能夠維持種類更多的細菌的生長。

      當細菌培養物需要在嚴格準確的條件下進行生長時，必須使用確定成分培養基。然而，當培養物僅僅作為一種DNA的來源時，就沒有必要用確定成分培養基，利用不確定成分培養基就更加合適。
      利用LB培養基，在37 ℃、150～250 r/min的條件下，培養大腸桿菌細胞，大約每20 min分裂一次，直到培養基中的細胞達到2×109～3×109個/mL的zui大密度。培養物的生長狀況可以通過讀取600 nm可見分光光度值（OD值）來監測，在該波長下，每個單位的OD值相當于0.8×109 個/mL。
      通過離心可以收集細胞。相對較低的轉速就能夠使細菌在離心管（centrifuge tube）的底部聚集，這樣一來上層的培養基就能夠很容易到出。