提取免疫球蛋白IgG的注意事項

1、操作過程可以在室溫下進行，但溫度不宜太高，應盡量在較低溫度下進行，避免蛋白質活性喪失；

2、鹽析前，血清要用等量的PBS（0.01mol/L pH7.2）或生理鹽水稀釋，可以減少其他蛋白質與γ-球蛋白的共沉現象。蛋白質含量低于3%時可不稀釋；
 

3、混有鐵離子的硫酸銨須除去鐵離子。方法是用15N NH40H凋pH至9，加熱，產生棕紅色沉淀，用濾紙濾除，再加稀硫酸（硫酸:水=1:2），調pH7.0～7.2穩定24h后再用；
 

4、飽和硫酸銨應逐滴加入，邊加邊攪，以減少局部高濃度硫酸銨所引起的共沉現象，攪拌速度不宜過快，以免產生泡沫；
 

5、蛋白質被沉淀后應在冰箱放置隔夜，使能結成較大的沉淀塊而易于分離。分離（離心沉淀或過濾）沉淀物應在4℃條件下進行，以免蛋白質變性；
 

6、以上程序（50%飽和度1 次，33%2～3次）可獲得較純的γ球蛋白，有時尚有混少量的β球蛋白；
 

7、如提純材料為血漿，則先應除去纖維蛋白質，方法是：先加入2.0%飽和度的硫酸銨，沉淀纖維蛋白質，離心沉淀除去之，然后繼續加硫酸銨至50%飽和度，以沉淀球蛋白。