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非標(biāo)記抗體免疫酶技術(shù)先用酶（HRP或AKP）去免動物（羊、兔和鼠等），使其產(chǎn)生價、特異性的抗酶抗體，再將該抗酶抗體與酶結(jié)合，形成五環(huán)的復(fù)合物，例如PAP（HRP）、APAAP（AKP）、GOAGO（GO）復(fù)合物。該復(fù)合物由于沒有一個抗體受到共價鍵的標(biāo)記，保留了免疫活性，相對分子質(zhì)量較小，對細(xì)胞的穿透性好。該技術(shù)主要有酶橋法和過氧化物酶抗過氧化物酶（PAP）復(fù)合物法，以及一些變型的方法。
非標(biāo)記抗體免疫酶技術(shù)首先用酶免疫動物制備成效價高、特異性強的抗酶抗體。在特異性抗體與抗酶抗體之間利用第二抗體作“橋梁”，將它們連接起來，再將酶結(jié)合在抗酶抗體上，經(jīng)顯色顯示抗原的定位。其基本流程為：抗原+特異性抗體一第二抗體（橋抗）一抗HRP抗體一HRP一DAB+H202（顯色）。因為橋抗體對特異性抗體的量是過剩的，與特異性抗體結(jié)合后還剩有抗原結(jié)合位點，能與抗酶抗體結(jié)合，所以橋抗體能起到連接特異性抗體和抗酶抗體的作用。在此過程中，酶是利用免疫學(xué)原理與抗酶抗體結(jié)合的，從而避免了由于酶標(biāo)記抗體而引起的酶和抗體的活性損害，提高了方法的敏感性，降低了非特異性染色。
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