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北京諾博萊德科技有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第1年

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當(dāng)前位置:北京諾博萊德科技有限公司>>生化試劑>>輔酶Ⅰ系列>> BE6009NADH 氧化酶oxidase NOX試劑盒 輔酶Ⅰ

NADH 氧化酶oxidase NOX試劑盒 輔酶Ⅰ

參  考  價(jià)面議
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)

產(chǎn)品型號(hào)BE6009

品       牌NobleRyder/諾博萊德

廠商性質(zhì)生產(chǎn)商

所  在  地北京市

更新時(shí)間:2025-03-31 11:14:43瀏覽次數(shù):73次

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供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 50T/48S
貨號(hào) BE6009 應(yīng)用領(lǐng)域 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,制藥/生物制藥
主要用途 NOX 能夠?qū)ADH 氧化為NAD,NADH 的氧化與 2,6 二lu酚靛藍(lán)(
NOX(EC 1.6.99.3)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,可在氧氣存在下,直接將NADH氧化為NAD。該酶不僅參與NAD 的再生,而且與免疫反應(yīng)密切相關(guān)。
NADH 氧化酶oxidase NOX試劑盒 輔酶Ⅰ

NADH 氧化酶(NADH oxidase,NOX)試劑盒說明書

分光光度法 50 管/48

NADH 氧化酶oxidase NOX試劑盒 輔酶Ⅰ

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義:

NOX(EC 1.6.99.3)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,可在氧氣存在下,直接將NADH氧化為NAD。該酶不僅參與NAD 的再生,而且與免疫反應(yīng)密切相關(guān)。

測(cè)定原理:

NOX 能夠?qū)?/span>NADH 氧化為NAD,NADH 的氧化與 2,6 二lu酚靛藍(lán)(DCPIP)的還原相偶聯(lián),藍(lán)色的DCPIP 被還原為無色的DCPIP,在 600nm 下測(cè)定藍(lán)色DCPIP 的還原速率計(jì)算出 NADH 氧化酶活性的大小。

組成:

產(chǎn)品名稱

BE6009-50T/48S

Storage

試劑一:液體

50ml

-20℃

試劑二:液體

10ml

-20℃

試劑三:液體

1ml

-20℃

試劑四:液體

50ml

4℃

試劑五:液體

6 ml

4℃

試劑六:粉劑

2

-20℃

說明書

一份

試劑六:粉劑×2 瓶,-20℃保存;臨用前每瓶加入 5ml 蒸餾水;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。

自備儀器和用品:

可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1ml 玻璃比色皿、研缽、冰、蒸餾水

樣本的前處理:

組織、細(xì)菌或細(xì)胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離:

準(zhǔn)確稱取 0.1g 組織或收集 500 萬細(xì)胞,加入 1ml 試劑一和 10μl 試劑三,用冰浴勻漿器或研缽勻漿。將勻漿 600g,4℃離心 5min。

棄沉淀,將上清液移至另一離心管中,11000g,4℃離心 10min。

上清液即為除去線粒體的胞漿蛋白,可用于測(cè)定從線粒體泄漏的NOX(此步可選做)。

步驟④中的沉淀即為線粒體,加入 200μl 試劑二和 2μl 試劑三,超聲波破碎(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10 秒,重復(fù) 30 次),用于NOX 活性測(cè)定。

血清(漿)樣品:直接檢測(cè)。

測(cè)定步驟:

1、分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 600nm,蒸餾水調(diào)零。

2、樣本測(cè)定

試劑四、試劑五和試劑六于 37℃(哺乳動(dòng)物)或 25℃(其它物種)孵育 5min。

在 1ml 石英比色皿中加入 40μl 樣本、700μl 試劑四、100μl 試劑五和 160μl 試劑六,混勻,記錄 600nm

處 20s 時(shí)吸光值A(chǔ)1 和 1min20s 后的吸光值A(chǔ)2,計(jì)算ΔA=A1-A2。

NOX 活力單位的計(jì)算:

1、血清(漿)NOX 活力的計(jì)算:

單位的定義:每ml 血清(漿)在每ml 反應(yīng)體系中每分鐘A600 變化 0.01 定義為一個(gè)酶活力單位。

NOX(U/ml)=ΔA×V 反總÷V 樣÷0.01÷T=2500×ΔA

2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中 NOX 活力的計(jì)算:

按樣本蛋白濃度計(jì)算:

單位的定義:每mg 組織蛋白在每ml 反應(yīng)體系中每分鐘A600 變化 0.01 定義為一個(gè)酶活力單位。

NOX(U/mg prot)=ΔA×V 反總÷(V 樣×Cpr)÷0.01÷T=2500×ΔA÷Cpr此法需要自行測(cè)定樣本蛋白質(zhì)濃度。

按樣本鮮重計(jì)算:

單位的定義:每g 組織在每ml 反應(yīng)體系中每分鐘A600 變化 0.01 定義為一個(gè)酶活力單位。

NOX(U/g 鮮重)=ΔA×V 反總÷(W× V 樣÷V 樣總)÷0.01÷T=505×ΔA÷W

按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:

單位的定義:每 1 萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在每 ml 反應(yīng)體系中每分鐘 A600 變化 0.01 定義為一個(gè)酶活力單位。

NOX(U/104 cell)=ΔA×V 反總÷(500×V 樣÷V 樣總)÷0.01÷T=1.01×ΔA

V 反總:反應(yīng)體系總體積,1ml; V 樣:加入樣本體積,0.04ml;V 樣總:加入提取液體積,0.202 ml;T:反應(yīng)時(shí)間,1 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/ml;W:樣本質(zhì)量;500:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),500 萬。


NADH 氧化酶oxidase NOX試劑盒 輔酶Ⅰ

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