實驗室超常用的蛋白濃度測定方法，看這一篇就夠了！選對方法，實驗效率倍增！

Part1 紫外吸收法(A280法)

蛋白質中的色氨酸（Trp）、酪氨酸（Tyr）和苯丙氨酸（Phe）殘基在280nm附近有紫外吸收峰。通過測量蛋白質溶液在 280 nm 處的吸光度值，可以估算蛋白質濃度。基于Beer-Lambert定律：A=εbc，其中A是吸光度，ε是摩爾消光系數，b是光程，c是濃度。對于蛋白質，ε和b在特定條件下可以視為常數，因此吸光度A與濃度c成正比。通常假設蛋白質的平均消光系數ε約為1.0(mg/mL)^-1 cm^-1。

The merits of this method 優點

快速簡便

操作非常簡單快捷，只需使用紫外分光光度計直接讀取280nm處的吸光度即可。

非破壞性

樣品可以回收，因為測量過程中樣品沒有被化學修飾或消耗。

不需要試劑

除了緩沖液，不需要額外的化學試劑。

不需要試劑

除了緩沖液，不需要額外的化學試劑。

靈敏度較高

比紫外吸收法和 Bradford 法更靈敏，可以檢測更低濃度的蛋白質。

受蛋白質組成影響相對較小

因為是基于肽鍵反應，受不同蛋白質氨基酸組成的影響比 Bradford 法小一些。

demerits of this method  缺點

操作步驟繁瑣

需要多個試劑，操作步驟較多，耗時較長。

試劑不穩定

Folin-Ciocalteu 試劑不穩定，容易受還原性物質污染，需要臨用前配制。

干擾多

容易受到多種化學物質的干擾，包括一些緩沖液成分（如Tris，EDTA），以及非離子型去垢劑、還原劑等。需要嚴格控制樣品和試劑的純度。

時間依賴性

顯色反應需要精確控制反應時間和溫度，反應時間過長或過短都會影響結果的準確性。

標準曲線依賴性

同樣需要使用標準蛋白質制作標準曲線。

Part4 BCA法

BCA法原理與Lowry法類似，也是基于兩個步驟的反應。第一步是蛋白質中的肽鍵將銅離子 在堿性條件下還原為亞銅離子 。第二步是亞銅離子與 BCA試劑(二喹啉甲酸)反應，形成紫色的 BCA-Cu*復合物，該復合物在 562nm 處有最大吸收。顏色的深淺與蛋白質濃度成正比。

merits of this method 優點

靈敏度高

與 Lowry 法靈敏度相當，比 Bradford 法和紫外吸收法高。

操作相對簡便

試劑相對穩定，通常試劑以預混形式提供，操作步驟比Lowry 法簡化。

受去垢劑干擾小

相對于 Lowry 法，受一些去垢劑(如 SDS,Triton X-100)的干擾較小，更適用于含有去垢劑的樣品。

線性范圍較寬

BCA法的線性范圍比 Bradford 法寬。

穩定性好

顯色后的復合物比 Bradford 法更穩定，可以放置較長時間再讀取數據。

demerits of this method  缺點

標準曲線依賴性

需要使用標準蛋白質制作標準曲線。

銅離子還原反應

基于銅離子還原反應，容易受到還原性物質的干擾。

時間和溫度依賴性

反應需要加熱孵育，結果受時間和溫度影響。

對脂類物質敏感

脂類物質會干擾 BCA反應。

Part5 雙縮脲法

雙縮脲法是最早用于蛋白質定量的方法之一。在強堿性條件下，含有兩個或兩個以上肽鍵的化合物(包括蛋白質)可以與銅離子反應，形成紫紅色的絡合物。這種絡合物的最大吸收波長在540nm左右。顏色的深淺與蛋白質濃度成正比。

merits of this method 優點

受蛋白質組成影響最小

因為是直接與肽鍵反應，受不同蛋白質氨基酸組成差異的影響最小，對不同蛋白質的定量相對比較準確。

干擾少

受樣品中常見的鹽、緩沖液、以及一些小分子物質的干擾較小。

demerits of this method  缺點

靈敏度低

相對于 Bradford法、Lowry法和BCA法，靈敏度低，通常只能用于測定較高濃度的蛋白質(>1mg/mL)。

需要大量樣品

由于靈敏度低，需要較高濃度的蛋白質樣品和較大量樣品才能獲得可讀的吸光度值。

操作步驟較多

需要配置試劑，操作步驟相對繁瑣。

標準曲線依賴性

需要使用標準蛋白質制作標準曲線。

Part6 相關耗材推薦

在實驗室蛋白檢測的各個環節，實驗耗材的品質對檢測結果的可靠性有著重要影響。愛津生物扎根生命科學領域，憑借多年積累的技術與持續創新，擁有一系列適配蛋白檢測的耗材，包含普通吸頭（低吸附款）、酶標板、微量離心管、常規離心管、細胞培養皿、培養板、培養瓶等。

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愛津生物，成立于2009年

致力于研發生產生物科研領域所需的優質產品

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