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酶聯免疫吸附測定ELISA實驗類型有哪些?

閱讀:1240      發布時間:2023-11-13
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酶聯免疫吸附測定ELISA實驗類型有哪些?有三種必需的試劑:已知的抗原或抗體(用于結合到固相載體上);酶標的抗體或抗原(標記物);顯色劑(用于顯色)。

常見的ELISA實驗有四種:直接ELISA、間接ELISA、夾心ELISA和競爭ELISA。

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1

直接ELISA (Direct ELISA)


直接ELISA法是將樣品中的抗原或抗體以非特異性方式直接吸附在包被板上,然后將特異性測定抗體或抗原加入到孔中,洗滌后加入底物顯色。相較于其它類型的ELISA實驗,直接ELISA實驗步驟少,檢測速度快,不需要用到二抗,避免了交叉反應,測定結果不容易出錯。但是由于直接ELISA的抗原不是特異性固定的,樣本中的所有蛋白質(靶蛋白及其他雜質蛋白)都會與ELISA板結合,實驗背景會比較高。而且直接ELISA每種靶蛋白都需要準備能夠與其特異性結合的一抗,實驗不太靈活。另外由于沒有使用二抗,信號沒有被放大,降低了測定的靈敏度。一般對抗原的免疫反應進行分析時,常會使用直接ELISA。



2

間接ELISA (Indirect ELISA)


間接ELISA法主要用于抗體的檢測,先將抗原結合到ELISA板上,隨后分兩步進行檢測:首先加入檢測抗體與抗原特異性結合,隨后加入酶標二抗檢測并利用底物顯色。與直接ELISA相比,間接ELISA用到酶標二抗,具有更高的靈敏度,也需要更少的標記抗體,更經濟。間接ELISA還提供了更大的靈活性,因為不同的一抗能夠與單一標記的二抗一同使用。間接ELISA實驗的缺點是存在交叉反應的可能性(酶標二抗直接與抗原結合),可能會增加背景,同時與直接ELISA相比,間接ELISA實驗多了二抗孵育的步驟,實驗周期增長。間接ELISA法適合測定樣品中總抗體的濃度。



3

夾心ELISA (Sandwich ELISA)


夾心ELISA實驗需要用到配對抗體(捕獲抗體和檢測抗體),其實驗原理是將捕獲抗體結合到ELISA板上,通過捕獲抗體固定抗原,隨后通過直接ELISA或間接ELISA的方式進行檢測。在夾心ELISA實驗中,最重要的是對配對抗體進行驗證,確保配對抗體能同時與抗原結合,以確保實驗的順利進行。



4

競爭ELISA (Competition ELISA)


競爭ELISA,先將特異性抗體包被于固相載體表面,經洗滌后分成兩組:一組加酶標記抗原和被測抗原的混合液,另一組只加酶標記抗原,經孵育洗滌后加底物顯色,這兩組底物降解量之差,即為所要測定的未知抗原的量。此方法測定的抗原只要有一個結合部位即可,對小分子抗原如激素和藥物類的測定常用此法。優點是快,缺點是需要較多量的酶標記抗原。在競爭ELISA實驗中,樣品中的抗原或抗體競爭性的結合特定數量的酶標抗體或抗原。樣品中抗原濃度越高,輸出信號越弱,信號輸出與樣品中抗原的量成反比。

本期內容:酶聯免疫吸附測定ELISA實驗類型有哪些?

下期內容:CCK-8試劑盒進行細胞增殖檢測的步驟是怎樣的?



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