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ELISA操作前必讀——【液體樣本處理】

時間:2024/2/26閱讀:1862
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可用于ELISA實驗的樣本一般有血清、血漿、尿液、細胞培養上清液以及組織勻漿等。不同樣本類型的預處理方法也不同。(由于ELISA只能檢測可溶性蛋白質的含量,因此要求樣本應清晰透明并離心除去沉淀物或懸浮物質)

液體樣本處理原則:所有的液體樣本,用無菌管收集,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)

【血清樣本】:將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置 2 小時或 4℃過夜,然后 1000×g 離心 20 分鐘,取上清即可,或將上清置于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。

注意事項:收集血液樣本應避免溶血,因為紅細胞在溶解時會釋放具有過氧化物酶活性的物質,這種情況下,ELISA實驗中將會出現非特異性顯色反應,導致檢測結果不準確,出現假陽性結果。另外,樣本還應避免細菌污染,因為細菌可能含有內源性HRP,也會導致檢測結果不準確。

【血漿樣本】:用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本,并將標本在采集后的30分鐘內于2-8℃ 1000×g離心15分鐘,取上清即可檢測,或將上清置于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。

注意事項:檢測前請仔細閱讀ELISA試劑盒說明書,查看該試劑盒針對抗凝劑是否有特殊要求。

【組織勻漿】:用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果),稱重后將組織jian碎。將jian碎的組織與對應體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應9mL的PBS,具體體積可根據實驗需要適當調整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞,可以對勻漿液進行超聲破碎,或反復凍融。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測。

【細胞培養物上清】:請1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將上清置于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。

【尿液、胸腹水、腦脊液】:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。

【樣品保存】:為確保實驗的準確性,樣品收集后若在1周內進行檢測的可保存于4℃,若不能及時檢測,請按一次使用量分裝,凍存于-20℃(1個月內檢測),或-80℃(6個月內檢測),避免反復凍融,標本溶血會影響最后檢測結果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。

【注意事項】:樣本中不能含有會抑制HRP活性的NaN3,否則會造成假陰性結果。

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