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| 供貨周期 | 現貨 | 規格 | 1 kit |
|---|---|---|---|
| 貨號 | CS-20002-100 | 應用領域 | 醫療衛生,化工,生物產業,制藥/生物制藥,綜合 |
產品簡介
詳細介紹
產品介紹
小鼠CD11b+cDC2樹突狀細胞培養試劑盒是為在體外培養和誘導小鼠造血前體細胞向成熟CD11b+cDC2樹突狀細胞（DC）亞群分化發育而專門設計的一款含血清培養基套裝。小鼠CD11b+cDC2樹突狀細胞培養試劑盒
產品特點
針對培養小鼠CD11b+cDC2樹突狀細胞而設計
產品成分
產品名稱 | Catlog# | 規格 | 儲存條件 |
小鼠 CD11b+cDC2 樹突狀細胞培養試劑盒 | CS-20002-100 | 1 kit | |
小鼠 CD11b+cDC2 樹突狀細胞基礎培養基 | CS-20002-B | 100ml | 4℃ |
小鼠 CD11b+cDC2 樹突狀細胞擴增補充因子 | CS-20002-EXS | 0.35ml | -20℃ |
小鼠 CD11b+cDC2 樹突狀細胞分化補充因子 | CS-20002-DES | 0.65ml | -20℃ |
預篩選樹突狀細胞專用胎牛血清 | CS-DCF-10 | 10ml | -20℃ |
其他本試劑盒未提供但需用的重要試劑
小鼠 c-kit+ 造血前體細胞磁珠分選試劑
*培養基配制
（在無菌生物安全柜中，開展以下操作）
1.在4℃冰箱解凍補充因子和胎牛血清，混勻后使用。
注：解凍后的補充因子和血清可放置于4℃冰箱，在1個月內使用；或者分裝至合適體積后，保存于-20℃冰箱，不可反復凍融！2.擴增培養基配制：將1體積的擴增補充因子和10體積的血清加入到89體積的基礎培養基中，充分混勻，得到小鼠cDC2樹突狀細胞擴增培養基。如取100ul補充因子和1ml血清加入至8.9ml基礎培養基，以此類推。
分化培養基配制：將1體積的分化補充因子和10體積的血清加入到89體積的基礎培養基中，充分混勻，得到小鼠cDC2樹突狀細胞分化培養基。
注：配好的*培養基請于4℃保存，且于1個月內使用完畢。使用說明
(請詳細閱讀使用說明后再開始相關實驗）
1.使用淋巴細胞分離液從小鼠骨髓總細胞中分離得到骨髓單個核細胞（BM-MNC），計數。
2.使用磁珠分選BM-MNC中c-kit+造血前體細胞（參考所使用試劑盒的說明書），計數.
注：一只小鼠骨髓中約含有1.5*10^6 c-kit+造血前體細胞，可根據需要調整進入分選的BM-MNC細胞量。3.D0：使用擴增培養基重懸BM-MNC，調整細胞密度至2.5*10^4/ml，按照如下表格所示將細胞鋪于培養板：
| 培養板 | 擴增培養基體積 | CD34+造血干/前體細胞數/孔 |
24孔板 | 1.0ml | 2.5*10^4 |
6孔板 | 4.0ml | 1*10^5 |
4.將培養板置于細胞培養箱，37℃，5%CO2，靜置培養。
5.D3：擴孔。輕輕吹打孔內細胞及培養基，按照1:3將原孔內懸浮細胞平均分至3個新孔中，同時補加新鮮擴增培養基至初始培養體積（步驟3表格）。
注：*培養基請恢復至室溫后使用，減少對細胞的刺激6.D6：1)擴孔：輕輕吹打孔內細胞及培養基，按照1:2將原孔內懸浮細胞平均分至2個新孔中；
2)誘導分化：在每個新孔內，補加等量分化培養基；
注：由于培養過程中培養基的揮發造成體積損失，該步驟加入分化培養基時可按照24孔板每孔加入0.5ml或6孔板每孔加入2ml分化培養基計算。D6時培養板底會有一定量貼壁細胞出現，擴孔時請輕輕吹打細胞，只將懸浮細胞轉移至新孔。貼壁細胞多為巨噬細胞，會影響最終DC純度。7.D8：1)小心貼培養板側壁用槍尖吸走1/2體積舊培養基；
2)轉孔：輕輕吹打細胞，收集懸浮細胞，按照1:1將原孔內懸浮細胞轉移至新孔中。補充 新鮮分化培養基至初始體積（步驟3表格）。
8.D10：輕輕吹打細胞，收集懸浮細胞，即為分化成熟的小鼠cDC2，可進行后續操作和分析。
注：如需研究特定刺激對DC 的影響，可提前加入相應刺激，待D10收集細胞進行分析。常見問題及提示
培養過程中，隨著培養時間的延長，有越來越多的細胞出現貼壁屬于正常現象，收集細胞操作時，請輕輕混勻后收取懸浮細胞進行后續分析，棄掉牢固貼壁的細胞（多為巨噬細胞）。
此系統培養出的總細胞，其中cDC2樹突狀細胞占總細胞比例應為80-95%范圍內。
數據展示
圖：小鼠CD11b+cDC2樹突狀細胞鑒定。取4-6周齡雄性C57BL/6小鼠按照上述說明培養CD11b+cDC2至第10天，收集懸浮細胞檢測DC產生和亞群分布。
