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超高效液相色譜法 | 香蘭素類添加劑的快速檢測
方案背景
香蘭素具有濃烈的奶香味，是食品加工中經常使用的香味添加劑，廣泛應用于食品和飲料中。食用香蘭素類香精含量過多的食品可能導致不適，甚至損害身體健康。我國《食品安全國家標準食品添加劑使用標準》(GB2760-2014) 中嚴格規定了較大嬰兒和幼兒配方食品中香蘭素的使用限量，并明確指出 0 – 6 個月嬰幼兒配方食品中不得添加。因此，必須對嬰幼兒配方食品中的香蘭素類添加劑進行準確檢測和嚴格控制。
現行《食品安全國家標準食品中香蘭素、甲基香蘭素、乙基香蘭素和香豆素的測定》(GB 5009.284-2021) 中規定的香蘭素、甲基香蘭素、乙基香蘭素和香豆素測定方法主要包括高效液相色譜法、液相色譜-串聯質譜法和氣相色譜-質譜法。使用國標法高效液相色譜法時，甲基香蘭素和乙基香蘭素不易*分離，影響定量結果的準確性。本文使用超高效液相色譜法 (UHPLC) 快速測定奶粉中的香蘭素、甲基香蘭素、乙基香蘭素和香豆素的含量，與國標法相比，具有更好的分離度、分析速度更快、靈敏度更高。
安捷倫方案
色譜條件
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色譜柱：Agilent Poroshell 120 CS-C18, 4.6 × 100 mm, 2.7 µm（部件號 695975-942）
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柱溫：30 ℃
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進樣量：5 μL
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流速：2 mL/min
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DAD 檢測器：檢測波長 279 nm，參比波長 400 nm
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流動相 A：0.5% 甲酸水溶液
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流動相 B：乙腈
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梯度洗脫程序：
樣品前處理
實際樣品參考 GB 5009.284-2021 中 5.1.2.1 的步驟進行處理，樣品前處理流程圖如下：
結果與討論
標準品分析色譜圖
四種標準物質在 Poroshell 120 CS-C18 色譜柱上獲得了較好的保留和出色的分離效果，四個色譜峰種小分離度可達 2.0 以上。
實際奶粉樣品分析色譜圖
實際樣品經前處理后，四個目標化合物與基質均能*分離，且運行時間只要 5 分鐘，即可完成單個樣品的分析，能明顯提日常分析效率。
小結
本文展示了一種采用 Agilent 1290 Infinity II 超高效液相色譜系統和 Poroshell 120 CS-C18 (4.6 × 100 mm, 2.7 µm) 色譜柱，能夠快速分析奶粉中香蘭素、甲基香蘭素、乙基香蘭素和香豆素的含量的超高效液相方法。該方法分離效果好、分析速度快，靈敏度高，線性和重復性優異，可適用于嬰幼兒奶粉中香蘭素、甲基香蘭素、乙基香蘭素和香豆素的日常檢測。