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數字PCR的運行階段

時間:2022/12/16閱讀:1528
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  數字PCR是一種核酸檢測和定量的新方法。同傳統PCR以及qPCR相比,增加了一步分液的操作,將幾十微升的已經配好的包含有引物、模板、buffer、酶等組分的PCR反應體系分隔成了眾多微小的、獨立的反應體系,這樣能夠直接數出DNA分子的個數,對起始樣品定量,通過將一個樣本分成幾萬到幾百萬份,分配到不同的反應單元,每個單元包含一個或多個拷貝的目標分子( DNA 模板) ,在每個反應單元中分別對目標分子進行PCR擴增,擴增結束后對各個反應單元的熒光信號進行統計學分析。如下圖:
 

數字PCR

 

  PCR 運行可以分為三個階段:
 
  指數期
 
  每個循環積聚的產物準確加倍(假定 100% 反應效率)。該反應具有高度特異性和準確度。出現指數式擴增,因為所有試劑均新鮮可用,反應的動力學推動反應有利于擴增子加倍。
 
  線性期(高變異性)
 
  隨著反應繼續,一些試劑因擴增而被消耗。反應開始減緩,并且每個循環的 PCR 產物不再加倍。
 
  平臺期(終點:使用傳統方法進行凝膠檢測)
 
  反應停止,不再產生更多產物,并且如果放置時間夠長,PCR 產物將開始降解。因為每個樣品具有不同的反應動力學,所以每支試管或每個反應將在不同的時間點進入平臺期。在平臺期可以看到這些差異。在平臺期內,傳統 PCR 進行測量,又稱為終點檢測。
 
  數字PCR檢測的是游離DNA,采血管為游離DNA管,采樣5-10ml。檢測過程包括核酸提取、芯片制備、PCR擴增、芯片閱讀、結果分析,實現全程基本自動化、封閉式操作,避免污染。無需培養,節省時間;高靈敏度,提高檢出率;多色熒光檢測,一管血可檢測23個靶標,節省寶貴樣本,幫助解決“檢出率低”和“檢測周期長”兩大痛點,達到早期診斷、療效監測的目的。

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