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DNA 甲基化測序常用方法2021/8/26
隨著高通量測序技術(shù)（NGS）技術(shù)的發(fā)展，使我們能夠從全基因組水平來分析5’甲基胞嘧啶及組蛋白修飾等事件，由此能夠發(fā)現(xiàn)很多傳統(tǒng)的基因組學(xué)研究所不能發(fā)現(xiàn)的東西，這就是所謂的“DNA甲基化測序”！DNA甲基...
電泳中的異常現(xiàn)象及其原因分析2021/8/26
跑電泳是分子生物學(xué)實驗的一項基本技術(shù)。只要做分子生物學(xué)方面的實驗，可能或多或少，或早或晚都要跑跑電泳。有時候，跑電泳跑著跑著也會出現(xiàn)一些奇奇怪怪的現(xiàn)象。下面，談一談跑電泳的過程中可能會發(fā)生的異常現(xiàn)象，...
【DNA 電泳】教你做果凍：瓊脂糖凝膠電泳實驗技巧分享2021/8/26
果凍晶瑩剔透，口感QQ的，其實果凍的原料瓊脂糖，也是我們平時用來跑電泳的材料，瓊脂糖凝膠電泳實驗常用以DNA切膠回收，DNA分離和用于佐證DNA是否重組、質(zhì)粒等是否切開。今天我們就來聊聊瓊脂糖凝膠電泳...
【教程】構(gòu)建載體其實一點也不難！2021/8/26
我們在研究基因的功能時，逃脫不掉的就是為了我們的實驗?zāi)康模赡苄枰獦?gòu)建各種載體，比如表達(dá)載體，克隆載體，基因打靶載體等等。很多人在構(gòu)建載體的時候都感覺很困難，特別是對于一個剛進(jìn)入實驗室的新人來說那更是...
表達(dá)融合蛋白時，如何把兩個基因拼接起來？2021/8/26
A君：我要表達(dá)一個ras加GFP融合蛋白，怎么設(shè)計引物？安培君：你的GFP標(biāo)簽蛋白在載體里還是要你自己插進(jìn)去？A君：是我自己插進(jìn)去。安培君：你打算怎樣融合？A君：是不是這樣？酶切A基因，酶切質(zhì)粒，把A...
教你如何做分子構(gòu)建，從此邁向科研達(dá)人！2021/8/25
做過分子實驗的人都知道，要想做的有效率有質(zhì)量是很苦逼的，1個月做100個克隆那都是小case，沒點看家的本事怎么行。如果再遇到比較稀有的基因，周旋個把月，那也是家常便飯。下面就和大家分享一些載體構(gòu)建的...
學(xué)學(xué)序列拼接，想節(jié)省費用的千萬別錯過！2021/8/25
相信大家PCR之后一般要進(jìn)行測序以保證擴增序列的正確性吧？由于測序能力的限制，目前好的公司也只能保證一個反應(yīng)800bp測準(zhǔn)。如果大家的克隆片斷大于1k，那么勢必要同時測兩個反應(yīng)，然后將兩個反應(yīng)得到的序...
你真的了解 TA 克隆嗎？2021/8/25
首先，TA克隆是用于PCR產(chǎn)物的克隆和測序。原理是利用Taq酶能夠在PCR產(chǎn)物的3’末端加上一個非模板依賴的A，而T載體是一種帶有3’T突出端的載體，在連接酶作用下，可以快速地、一步到位地把PCR產(chǎn)物...
上圖！教你秒懂重組 DNA 技術(shù)常用工具酶！2021/8/25
1分子剪刀——限制性內(nèi)切酶：作用：識別特異序列，切割DNA限制酶的命名是根據(jù)細(xì)菌種類而定，以EcoRI為例：2膠水——DNA連接酶作用：跟限制性內(nèi)切酶對著干，催化DNA中相鄰核苷酸間形成磷酸二酯鍵，使...
如何解決酶切切過頭的問題？2021/8/25
之前談到了酶切切不動的問題。這一次，我們探討一下酶切的另外一端：酶切切過頭的問題。還是按照一貫的做法和思路，發(fā)現(xiàn)主要是兩個原因?qū)е碌模鉀Q辦法也是有的。一、酶切時間過長酶切時間過長的確有時候會對目的條...
【技術(shù)】酶切、酶切，切還是不切？2021/8/24
酶切，作為一種常用的分子克隆的手段，如果應(yīng)用得當(dāng)，可謂寶刀屠龍，無往而不利；如果應(yīng)用不當(dāng)，又會步步維艱。真是讓人歡喜讓人憂愁。酶切，最常見的問題就是切不動和切過了。這些問題比較復(fù)雜。下面，先講一講切不...
瓊脂糖凝膠電泳、酶和試劑的使用等一些注意事項2021/8/24
基因克隆在發(fā)明后的32年，需求一直不斷增加，但是有些小伙伴的重組質(zhì)粒就是怎么樣都構(gòu)建不出來。其實，看似簡單的傳統(tǒng)基因克隆，可是存在著重重陷阱！美國羅林斯研究中心（RollinsResearchCent...
DNA載體構(gòu)建——【干貨】三圖讓你秒懂質(zhì)粒圖譜2021/8/24
很多人拿到一個質(zhì)粒圖譜，第一反應(yīng)只能是仰天長嘯，這是什么玩意？這些ori、RBS、tet是什么鬼？這些箭頭代表什么，轉(zhuǎn)錄的方向嗎？為什么都不相同，不會“撞車”么？來，看幾張圖，上面的問題就能一一破解。...
為什么不能用質(zhì)粒DNA抽提試劑來提取基因組DNA？2021/8/24
導(dǎo)讀為什么同樣抽提質(zhì)粒DNA的試劑不能用來抽提基因組DNA呢？差別很大么？要買兩種試劑盒真是麻煩啊！你還不要不相信，有小伙伴試過，還真沒抽提出來。今天小編就來和大家一起探究下原因！基因組DNA的抽提，...
【技術(shù)貼】DNA 純化實驗的幾種常用方法2021/8/24
DNA純化是分子生物學(xué)研究中經(jīng)常需要用到的一種方法。一般來說，做DNA純化有3個目的：1.獲得高純度的DNA；2.濃縮DNA；3.用DNA做測序，芯片等生物信息學(xué)方面的實驗。下面，談一談DNA純化的幾...
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