人臍靜脈內皮細胞消化和復蘇的步驟方法
人臍靜脈內皮細胞在進行血管內皮細胞實驗時,通常選用的細胞模型為人臍靜脈內皮細胞(Human umbilical vein endothelial cells,簡稱HUVECs)。而不是直接采用靜脈血管內皮細胞或動脈血管內皮細胞。原因是臍靜脈內皮細胞具有干細胞的潛能,理論上可以傳代50-60次。
人臍靜脈內皮細胞消化方法:消化液:用pH7.0-7.2的PBS或D-Hank’S液,分別配制0.25%胰酶液和0.02%EDTA-Na2液,用前按1:1混合。在細胞傳代或凍存前先消化細胞。具體操作如下:吸凈培養液,每瓶加消化液1ml,搖勻使其布滿培養瓶細胞面。37℃消化2-5分鐘。顯微鏡下看細胞回縮成圓形后,輕輕震動使絕大部細胞脫落后,每瓶加含10%FBS的RPMI-1640液的中和液4-5ml中和胰酶的消化作用,并用吸管輕輕吹打培養面使細胞*脫落后,吸至15ml無菌離心管內。4℃1500rpm離心10分鐘棄上清,再用中和液洗滌細胞,離心棄上清,加適量RPMI-1640液,混勻后取10ul 細胞懸液加10ul臺盼藍混勻后作細胞計數,按需要做步驟四或五。
人臍靜脈內皮細胞細胞復蘇:
從液氮中取出細胞凍存管,迅速放入37℃水浴中解凍至管內殘留一點冰屑。用75%酒精擦拭凍存管后,將內容物吸至一15ml無菌離心管中,逐滴加入預溫至37℃的RPMI-1640培液4-5ml混勻,室溫1500rpm離心10分鐘棄上清。再用RPMI-1640培液4-5ml洗滌一次,離心后棄上清,加HUVEC*培養液4-5ml備用,每支HUVEC凍存管含細胞量為5×105個。