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一、永生化牛胃上皮細胞簡介：雖然原代牛胃上皮細胞最更能真實地反映胃上皮細胞在牛體內(nèi)的生理狀態(tài)，但是一方面由于原代分離培養(yǎng)牛胃上皮細胞周期長及對技術(shù)人員經(jīng)驗要求較高，另一方面此原代細胞在體外不能傳代，每次取材和分離培養(yǎng)原代牛胃上皮細胞比較麻煩，這些不利因素制約了原代牛胃上皮細胞在實驗室的廣泛應用

一、永生化牛胃上皮細胞簡介：

雖然原代牛胃上皮細胞最更能真實地反映胃上皮細胞在牛體內(nèi)的生理狀態(tài)，但是一方面由于原代分離培養(yǎng)牛胃上皮細胞周期長及對技術(shù)人員經(jīng)驗要求較高，另一方面此原代細胞在體外不能傳代，每次取材和分離培養(yǎng)原代牛胃上皮細胞比較麻煩，這些不利因素制約了原代牛胃上皮細胞在實驗室的廣泛應用。我公司的研究團隊擁有多年原代細胞分離培養(yǎng)及細胞永生化服務(wù)研究經(jīng)驗，成功建立了永生化牛胃上皮細胞。
胃上皮細胞具有很高的更新速度，各種上皮細胞具有不同的代謝周期，處于一種動態(tài)的、精致的平衡之中。胃粘膜由許多胃單位構(gòu)成的，每個胃單位由頂細胞、壁細胞、主細胞、頸粘液細胞、多能干細胞以及少量的內(nèi)分等多種上皮細胞組成,其中頂細胞、壁細胞、主細胞是胃粘膜最主要的三種細胞。各種上皮細胞均來源于峽部的多能干細胞，每種細胞具有不同的功能和更新速率。細胞分化、增殖和凋亡的改變直接影響到胃粘膜結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定,是導致胃相關(guān)疾病發(fā)生的原因。
本公司生產(chǎn)的永生化牛胃上皮細胞采用酶解法和基因轉(zhuǎn)染制備而來，細胞總量約為1×10⁶/T25方瓶，細胞純度可達90%以上，且不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
二、使用方法

1 、您收到細胞后，請按照以下方法進行操作：
取出 T25 方瓶， 75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，拆下封口膜，放入 37℃ , 5%CO2 細胞培養(yǎng)箱中靜置 2-3 小時，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)，然后打開瓶子回收瓶子中培養(yǎng)液作為后續(xù)培養(yǎng)此細胞的培養(yǎng)液（備注：先使用瓶子中培養(yǎng)液培養(yǎng)及盡快凍存保種細胞，保存種子后再嘗試自己完全培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察是否適合此細胞生長，以免使用自己培養(yǎng)液不適合細胞生長造成細胞狀態(tài)不好或死亡） ，最后按照后面細胞傳代步驟進行細胞傳代培養(yǎng)。
2 、細胞傳代：
1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 90%面積時，棄 T25 方瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細胞 3 次；
2）添加 0.25%消化液約 2ml 至培養(yǎng)瓶中 37 度培養(yǎng)箱放置 3-5 分鐘，倒置顯微鏡下觀察，待細胞基本脫落后加入培養(yǎng)基終止消化，用滴管混勻并將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm/min，離心 5min；
3）棄上清，沉淀細胞用 10ml 培養(yǎng)基重懸，然后按 1:2 比例進行分瓶傳代，最后放入 37℃ ,5%CO2 細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4）待細胞貼壁后，觀察培養(yǎng)結(jié)果，之后進行換液培養(yǎng)或傳代。
3 、細胞凍存：
1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 90%面積時，棄 T25 方瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細胞 3 次；
2）添加 0.25%消化液約 2ml 至培養(yǎng)瓶中 37 度培養(yǎng)箱放置 3-5 分鐘，倒置顯微鏡下觀察，待細胞基本脫落后加入培養(yǎng)基終止消化，用滴管混勻并將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm/min，離心 5min；
3）用適當量的凍存液（培養(yǎng)液： FBS：DMSO=7:2:1）重懸細胞，并放置于凍存管中；
4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1h，然后將其移入-80℃過夜， 24h 后轉(zhuǎn)入液氮中進行長期儲存（或者按照梯度程序降溫模式直接放置-80 度凍存后并轉(zhuǎn)移液氮中長期儲存）。
4、細胞復蘇：
1）從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入 37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結(jié)晶，然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁；

2）將凍存管中的細胞轉(zhuǎn)移至含 5ml 培養(yǎng)液無菌離心管中，1000rpm 離心 5min ，然后加入 5ml 完全培養(yǎng)液混勻細胞，將細胞懸液轉(zhuǎn)移至 T25 培養(yǎng)瓶中，放置于 37℃ , 5%CO2 細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
3）第二天，換用新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

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