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一、小鼠支氣管上皮細胞簡介呼吸道上皮細胞是由纖毛、無纖毛和能分泌黏液的細胞按照從近端到遠端呼吸道分布的混合細胞群組成

一、小鼠支氣管上皮細胞簡介

呼吸道上皮細胞是由纖毛、無纖毛和能分泌黏液的細胞按照從近端到遠端呼吸道分布的混合細胞群組成。這類細胞的各個亞型細胞各具特點，從而不僅能形成物理屏障，可有效的防止多種有毒物質，而且通過產生和分泌大量化學介質和細胞因子形成高度復雜的宿主防御系統。支氣管上皮由表面的上皮細胞和粘液腺體組成。表面的上皮細胞由基細胞，杯狀細胞和纖毛細胞三種細胞構成，形成了基底柱狀結構，并能清除粘液纖毛。用支氣管上皮細胞培養分化誘導纖毛表型的研究顯示，IL-4和IL-13的刺激能改變增殖、纖毛運動、黏液分泌等一系列細胞功能。支氣管上皮細胞增殖以及其它細胞過程也部分受到EGF受體信號的調節。支氣管上皮細胞的培養為我們研究這類細胞的功能和病理生理機制提供了一個體外模型。
本公司生產的小鼠支氣管上皮細胞采用酶解法制備而來，細胞總量約為5×10⁵/T25方瓶，細胞純度可達90%以上，且不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
二、使用方法

1 、您收到細胞后，請按照以下方法進行操作：
取出 T25 方瓶， 75%酒精擦拭培養瓶，拆下封口膜，放入 37℃ , 5%CO2 細胞培養箱中靜置 2-3 小時，以穩定細胞狀態，然后打開瓶子回收瓶子中培養液作為后續培養此細胞的培養液（備注：先使用瓶子中培養液培養及盡快凍存保種細胞，保存種子后再嘗試自己完全培養液培養觀察是否適合此細胞生長，以免使用自己培養液不適合細胞生長造成細胞狀態不好或死亡） ，最后按照后面細胞傳代步驟進行細胞傳代培養。
2 、細胞傳代：
1）細胞生長至覆蓋培養瓶的 90%面積時，棄 T25 方瓶中的培養液，用 PBS 清洗細胞 3 次；
2）添加 0.25%消化液約 2ml 至培養瓶中 37 度培養箱放置 3-5 分鐘，倒置顯微鏡下觀察，待細胞基本脫落后加入培養基終止消化，用滴管混勻并將懸液轉移至 15ml 離心管中，1000rpm/min，離心 5min；
3）棄上清，沉淀細胞用 10ml 培養基重懸，然后按 1:2 比例進行分瓶傳代，最后放入 37℃ ,5%CO2 細胞培養箱中培養；
4）待細胞貼壁后，觀察培養結果，之后進行換液培養或傳代。
3 、細胞凍存：
1）細胞生長至覆蓋培養瓶的 90%面積時，棄 T25 方瓶中的培養液，用 PBS 清洗細胞 3 次；
2）添加 0.25%消化液約 2ml 至培養瓶中 37 度培養箱放置 3-5 分鐘，倒置顯微鏡下觀察，待細胞基本脫落后加入培養基終止消化，用滴管混勻并將懸液轉移至 15ml 離心管中，1000rpm/min，離心 5min；
3）用適當量的凍存液（培養液： FBS：DMSO=7:2:1）重懸細胞，并放置于凍存管中；
4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1h，然后將其移入-80℃過夜， 24h 后轉入液氮中進行長期儲存（或者按照梯度程序降溫模式直接放置-80 度凍存后并轉移液氮中長期儲存）。
4、細胞復蘇：
1）從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入 37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結晶，然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁；

2）將凍存管中的細胞轉移至含 5ml 培養液無菌離心管中，1000rpm 離心 5min ，然后加入 5ml 完全培養液混勻細胞，將細胞懸液轉移至 T25 培養瓶中，放置于 37℃ , 5%CO2 細胞培養箱中培養；
3）第二天，換用新鮮培養基繼續培養。

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