細 胞 基 本 信 息
▲SK-LU-1細胞正常生長形態(tài)照片
--細 胞 基 本 信 息---
細胞名稱: SK-LU-1(人低分化肺腺癌細胞)
細胞別稱: SK-Lu-1; SK LU 1; SK-Lu1; SK-LU1; SKLU-1; SKLU1; SKLU01
細胞貨號: SNL-229
生長特性: 貼壁
培養(yǎng)條件: DMEM+10% FBS+1% P/S
培養(yǎng)環(huán)境: 空氣，95%；二氧化碳 (CO2)，5%
細胞簡介: SK-LU-1細胞來源于一名64歲患有肺腺癌（III級）的白人女性。SK-LU-1細胞在免疫耐受大鼠中是致瘤的。SK-LU-1細胞支原體污染于1971年被發(fā)現(xiàn)并消除，可以用于3D細胞培養(yǎng)。
細 胞 凍 存 攻 略
凍存步驟:
1、先將細胞按傳代步驟消化、離心，至傳代步驟4，棄細胞上清，獲得細胞沉淀；
2、加入適量預(yù)先配好的程序性凍存液輕輕重懸細胞，并將細胞懸液轉(zhuǎn)移至做好標(biāo)記的凍存管中；
3、將凍存管放入程序性凍存盒，放入-80℃冰箱過夜；
4、轉(zhuǎn)移細胞至液氮保存并登記細胞保存位置，液氮保存24h后建議復(fù)蘇一管檢測凍存細胞的活性，若活性合格即可長期保存，若低于80%建議重新凍存；
Tips：
◎1. 檢測凍存細胞活性結(jié)果未合格前，培養(yǎng)瓶內(nèi)細胞建議繼續(xù)培養(yǎng)直至確認凍存合格方可視需要丟棄；
◎2. 程序性凍存液需要配合程序性凍存盒使用，若使用非程序凍存液可以按產(chǎn)品說明書處理降溫過程；
◎3. T25培養(yǎng)瓶長滿通常可以凍存2-3管，10cm皿長滿可以凍存3-4管；
細 胞 復(fù) 蘇 攻 略
復(fù)蘇步驟:
1、將所需的培養(yǎng)基放在培養(yǎng)箱預(yù)熱30min后開始復(fù)蘇；
2、準(zhǔn)備37度溫水，將細胞從液氮罐取中出，觀察管內(nèi)無液氮的情況下，捏住管蓋，將細胞凍存部分浸入溫水輕輕搖晃，融化至米粒大小冰塊，終止水浴；
3、將凍存管以離心力150g(約900rpm)左右離心1-2min，不同離心機具體轉(zhuǎn)速會有差異；
4、離心完成后，棄凍存液，用剛才預(yù)熱的培養(yǎng)基緩慢加入凍存管，并輕柔重懸細胞后接種至T25或者10cm皿中。
Tips：
◎1. 凍存管在液氮長期保存過程中難免滲入液氮，取出細胞時震動不要過大，水浴前一定要觀察管內(nèi)是否存在液氮，若有液氮建議靜置一會待液氮蒸發(fā)后再水浴；
◎2. 水浴時可以使用一次性PE手套包住凍存管避免直接接觸水源，以降低管蓋縫隙滲入水導(dǎo)致污染的概率；
◎3. 水浴至剩米粒大小時及時終止水浴，避免過度水浴或水浴時間不足；
◎4. 建議水浴完成后直接在離心管內(nèi)離心細胞，避免再次轉(zhuǎn)移細胞；
◎5. 復(fù)蘇后的細胞比較脆弱，吹打和轉(zhuǎn)移細胞時盡量輕柔，復(fù)蘇24h后換液去除死亡細胞；
#常見問題及解決方案
一、細胞密度怎么計算的？
嚴(yán)格意義上，細胞密度需要收集細胞懸液計數(shù)細胞數(shù)量，但在實際培養(yǎng)過程中，并不需要為了精確控制細胞數(shù)量而消化細胞計數(shù)。因此，常用的細胞密度指細胞相對于最大生長密度的比值，貼壁細胞可以粗略的用細胞所占培養(yǎng)容器底面積百分比表示，即顯微鏡下觀察培養(yǎng)容器底部，有細胞的區(qū)域占總區(qū)域的百分比值，當(dāng)然這種表達方式受限于單個細胞生長不同密度時所占面積不同導(dǎo)致并不嚴(yán)謹(jǐn)，但也是相對直觀、簡便的表現(xiàn)細胞狀態(tài)的一種方式；
二、培養(yǎng)過程中細胞碎片較多怎么處理？
1. 細胞內(nèi)的黑色顆粒是細胞外分泌泡及細胞器折光，這個屬于細胞自身特性，無法清除也無法改變，大部分細胞都會有這種現(xiàn)象，只是不同細胞顆粒多少有區(qū)別，細胞培養(yǎng)體系不適應(yīng)、營養(yǎng)缺乏、滲透壓異常等均可能導(dǎo)致細胞內(nèi)顆粒增加，建議使用合適的培養(yǎng)條件。
2. 細胞外的黑色顆粒大部分是細胞碎片和細胞代謝產(chǎn)物，可以先吸走培養(yǎng)基后用PBS潤洗清除，再加新的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。潤洗不能清除的可以換液清洗后等細胞密度70-80%左右消化處理細胞，消化完成后加培養(yǎng)基終止消化，混勻細胞，收集細胞懸液900-1000rpm(約150g)離心3min，棄上清。再加5ml PBS重懸細胞，再離心后，用培養(yǎng)基重懸接種到新的培養(yǎng)皿。第二次PBS重懸是為了去除碎片，如果平時碎片比較少，傳代時可以省略PBS重懸的步驟；如果碎片很多，建議PBS多洗幾次。
三、細胞具體消化時間是多久？
每個客戶用的胰酶活力及消化步驟、試劑都是不一樣的，不能規(guī)定消化時間，以實際消化效果和客戶經(jīng)驗為準(zhǔn)。
文 獻 引 用
Title:
USP5-Beclin 1 axis overrides p53-dependent senescence and drives Kras-induced tumorigenicity
Journal: Nature Communications
Date: 2022/12/23
Product name： SK-LU-1(人低分化肺腺癌細胞)
產(chǎn) 品 推 薦
【SNL-492】SK-LU-1(人低分化肺腺癌細胞)
【SNLM-492】SK-LU-1細胞專用培養(yǎng)基
【SNT-001】0.25%胰酶（不含EDTA）
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