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干貨!!SK-LU-1(人低分化肺腺癌細胞)傳代標準操作流程

閱讀:1182      發布時間:2023-2-20
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 細胞基本信息

 

 

--細 胞 基 本 信 息---

細胞名稱: SK-LU-1(人低分化肺腺癌細胞)

細胞別稱: SK-Lu-1;SK LU 1;SK-Lu1;SK-LU1;SKLU-1;SKLU1;SKLU01

細胞貨號: SNL-229

生長特性: 貼壁

培養條件: DMEM+10% FBS+1% P/S

培養環境: 空氣,95%;二氧化碳 (CO2),5%

細胞簡介: SK-LU-1細胞來源于一名64歲患有肺腺癌(III級)的白人女性。SK-LU-1細胞在免疫耐受大鼠中是致瘤的。SK-LU-1細胞支原體污染于1971年被發現并消除,可以用于3D細胞培養。

 

 

SK-LU-1細胞正常生長形態照片

 

 

 

 SK-LU-1(人低分化肺腺癌細胞)的特點

 

 


1、細胞顆粒感較重

細胞傳代培養時細胞內黑點及細胞外顆粒較多,建議使用優質血清及培養基培養細胞;


2、傳代、復蘇注意細胞狀態

細胞消化或者復蘇操作不當容易導致細胞死亡裂解產生大量碎片及顆粒,進而影響活細胞狀態,注意消化或復蘇過程盡量輕柔,嚴格控制消化時間和復蘇操作規范,傳代或復蘇24h后建議觀察細胞,建議換液一次去除死亡細胞;

 

 

細胞收貨攻略


常溫細胞

 

1. T25瓶收貨后,拆開外包裝,用75%酒精消毒T25瓶表面,放37℃培養箱靜置2-4h;

2. 吸走大部分培養基并留10-12 ml,顯微鏡下拍照保存細胞狀態照片,觀察細胞密度,若細胞密度大于80%即可按比例傳代(傳代比例建議1:2),若細胞密度低于70%可以留10-12 ml繼續培養至細胞密度80%以上再進行傳代培養;

 


凍存細胞

1. 細胞收貨后盡快開箱檢查,若干冰充足可以取出細胞迅速置于-80℃冰箱(2-3天內復蘇)短期保存或液氮中長期保存,若干冰揮發建議立即復蘇細胞并聯系銷售人員解決;

2. 凍存細胞建議盡快復蘇一管培養檢查,以免超出售后期,復蘇步驟參考復蘇攻略;

3. 復蘇一管細胞出現異常及時聯系銷售人員,在專業技術支持的指導下進行下一步操作;

 

 

Tips:

1. 細胞收貨出現漏液、培養瓶破損、干冰揮發等異常情況時,及時拍照聯系銷售人員;

 

2. 該細胞貼壁生長,一般T25瓶運輸過程中較少出現大量細胞脫落并聚團的情況,少量細胞脫落是正常狀態,不影響細胞生長,按正常操作步驟繼續培養即可。

 

3. 尚恩生物T25瓶發貨的細胞內含對應細胞的培養基,可以收集原裝培養瓶內培養基經1500rpm離心5min后,取上清于4℃保存用于后續細胞培養;

 

 

細胞傳代攻略

 

 

1. 先盡量吸干凈T25瓶原培養基,再加3-4ml 常溫PBS輕輕潤洗細胞10-20s,吸走潤洗的PBS;

2. T25瓶加1ml左右胰酶,輕輕晃動培養瓶以使胰酶鋪勻瓶底細胞層,將培養瓶放入37度培養箱消化;

3. 消化到細胞間隙變大,但未脫落時加2-3ml培養基終止胰酶消化;

4. 混勻細胞,900rpm離心3-5min,棄上清;

5.加新的培養基輕輕重懸細胞,均勻分到新的培養瓶里,補足培養基,將培養瓶放回培養箱靜置培養;

 

 

Tips:

1. 對于消化細胞程度,客戶如果經驗不多,無法準確掌控胰酶作用時間,建議客戶按照下述操作:胰酶首先復溫到室溫后加入細胞,放入37度培養箱,然后每隔30秒,即吹打下細胞(此時吹打細胞應盡量輕柔,不能強行將細胞吹下,否則細胞可能出現機械損傷),如果能夠吹打散細胞,說明細胞消化完成可以終止消化,如果30秒吹打不下,再等30秒重復操作直至能夠輕柔的吹下細胞;

 

2. T25瓶加10-12ml培養基,10cm皿加12-15ml,2-3天換液一次。

 

3. 細胞收貨后傳代建議按1:2傳代,后續培養可以視具體細胞生長狀態和密度情況決定傳代比例;

 

4. 傳代后24h建議觀察細胞并換液一次去除死亡細胞;



文獻引用

 

圖片1.png 

 

 

CAT#:            SNL-492

Product name:   SK-LU-1(人低分化肺腺癌細胞)

Date:            2022/12/23

Journal:         Nature Communications

Impact Factor:   17.694

Title:        

USP5-Beclin 1 axis overrides p53-dependent senescence and drives Kras-induced tumorigenicity

PMID:           PMID: 36528652

 

 


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