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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
等孢球蟲通用探針法熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒是即用型PCR試劑盒的改良產(chǎn)品， 含有Taq DNA 聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液、PCR 增強(qiáng)劑、上樣染料等所有PCR 所需要的成分，用戶只需加入模板和引物即可進(jìn)行PCR 反應(yīng)，具有廣泛的用途。
詳細(xì)介紹
產(chǎn)品特征:
靈敏度高：能對(duì)低拷貝或多樣性模板進(jìn)行定量。
特異性強(qiáng)：采用熱啟動(dòng)酶的激活機(jī)制，抑制非特異性擴(kuò)增 。
重復(fù)性好：擴(kuò)增曲線重合度高，受干擾影響少。
擴(kuò)增效率高：擴(kuò)增曲線Ct值低，起峰快，效率高。
原理:
所謂實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。產(chǎn)品僅用于科研
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Isospora spp. |
貨號(hào) | CP934380 |
等孢球蟲通用探針法熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀?；靹蚝?，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí)，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。
檢測(cè)方法：
1.Ⅰ法：
在PCR反應(yīng)體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后，發(fā)射熒光信號(hào)，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào)，從而保證熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。
定量PCR擴(kuò)增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法：
探針完整時(shí)，產(chǎn)品僅用于科研報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收；PCR擴(kuò)增時(shí)，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào)，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個(gè)熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步。
需要自備的器材：
1．儀器：分析天平、離心機(jī)、熒光 PCR 擴(kuò)增儀、組織研磨器、-20 ℃冰箱、可調(diào)移液器（2 µL、20µL、200 µL、1000 µL）。
2．耗材：熒光 PCR 反應(yīng)管、眼科剪、眼科鑷、生理鹽水、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯（DEPC）水
處理的滅菌離心管、吸頭（10 µL、200 µL、1000 µL）、滅菌雙蒸水。
具有下列特點(diǎn)：
1.即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板，操作簡(jiǎn)單，定量準(zhǔn)確快速。
2. 引物經(jīng)過優(yōu)化，特異性強(qiáng)。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長(zhǎng)度為 560 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽性對(duì)照，便于分析試驗(yàn)結(jié)果。
以下是等孢球蟲通用探針法熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒的相關(guān)產(chǎn)品：
三醇胺植物鈣鎂ATP酶（Ca＋＋/Mg＋＋ －ATPase）活性比色法定量檢測(cè)試盒
三異醇胺動(dòng)物細(xì)胞鎂ATP酶（Mg＋＋ －ATPase）活性比色法定量檢測(cè)試盒
三月桂胺動(dòng)物組織鎂ATP酶（Mg＋＋ －ATPase）活性比色法定量檢測(cè)試盒
三正基胺細(xì)菌鎂ATP酶（Mg＋＋ －ATPase）活性比色法定量檢測(cè)試盒
色胺酵母鎂ATP酶（Mg＋＋ －ATPase）活性比色法定量檢測(cè)試盒
十八胺植物鎂ATP酶（Mg＋＋ －ATPase）活性比色法定量檢測(cè)試盒
十二二苯胺動(dòng)物細(xì)胞/鉀ATP酶（H＋/K＋－ATPase）活性比色法定量檢測(cè)試盒
十一胺動(dòng)物組織/鉀ATP酶（H＋/K＋－ATPase）活性比色法定量檢測(cè)試盒
叔辛胺細(xì)菌/鉀ATP酶（H＋/K＋－ATPase）活性比色法定量檢測(cè)試盒
雙酮烯酰胺酵母/鉀ATP酶（H＋/K＋－ATPase）活性比色法定量檢測(cè)試盒
等孢球蟲通用探針法熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒雙氰胺植物/鉀ATP酶（H＋/K＋－ATPase）活性比色法定量檢測(cè)試盒
順烯二酰亞胺動(dòng)物細(xì)胞ATP酶（H＋－ATPase）活性比色法定量檢測(cè)試盒
四基二胺動(dòng)物組織ATP酶（H＋－ATPase）活性比色法定量檢測(cè)試盒
四亞基五胺細(xì)菌ATP酶（H＋－ATPase）活性比色法定量檢測(cè)試盒
四烯五胺酵母ATP酶（H＋－ATPase）活性比色法定量檢測(cè)試盒Potassium Phosphate Solution，0.2M, pH7.2 Potassium Phosphate Solution，0.2M, pH7.2 常溫保存500mL
Potassium Phosphate Solution，0.2M, pH7.0 Potassium Phosphate Solution，0.2M, pH7.0 常溫保存500mL
Potassium Chloride Solution（化鉀溶液）,5M Potassium Chloride Solution,5M 常溫保存50mL
Potassium Chloride Solution（化鉀溶液）,3M Potassium Chloride Solution,3M 常溫保存50mL
Potassium Chloride Solution（化鉀溶液）,1M Potassium Chloride Solution,1M 常溫保存50mL
Potassium Acetate Solution(酸鉀溶液），8M Potassium Acetate Solution，8M 常溫保存100mL
Potassium Acetate Solution(酸鉀溶液），3M Potassium Acetate Solution，3M 常溫保存50mL
Potassium Acetate Solution(酸鉀溶液），20% Potassium Acetate Solution，20% 常溫保存250mL
Potassium Acetate Solution(酸鉀溶液）,1M,pH7.5 Potassium Acetate Solution,1M,pH7.5 常溫保存50mL
Potassium Acetate Solution(酸鉀溶液），1M Potassium Acetate Solution，1M 常溫保存50mL