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產品簡介
大片吸蟲通用探針法熒光定量PCR檢測試劑盒是即用型PCR試劑盒的改良產品， 含有Taq DNA 聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應緩沖液、PCR 增強劑、上樣染料等所有PCR 所需要的成分，用戶只需加入模板和引物即可進行PCR 反應，具有廣泛的用途。
詳細介紹
產品特征:
靈敏度高：能對低拷貝或多樣性模板進行定量。
特異性強：采用熱啟動酶的激活機制，抑制非特異性擴增 。
重復性好：擴增曲線重合度高，受干擾影響少。
擴增效率高：擴增曲線Ct值低，起峰快，效率高。
原理:
所謂實時熒光定量PCR技術，是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程，后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。產品僅用于科研
產品名稱 | |
英文名稱 | Fasciola spp. |
貨號 | CP934232 |
大片吸蟲通用探針法熒光定量PCR檢測試劑盒熒光定量PCR實驗步驟：
①取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
檢測方法：
1.Ⅰ法：
在PCR反應體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈后，發射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產物的增加*同步。
定量PCR擴增熒光曲線圖
PCR產物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法：
探針完整時，產品僅用于科研報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收；PCR擴增時，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監測系統可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現了熒光信號的累積與PCR產物的形成*同步。
需要自備的器材：
1．儀器：分析天平、離心機、熒光 PCR 擴增儀、組織研磨器、-20 ℃冰箱、可調移液器（2 µL、20µL、200 µL、1000 µL）。
2．耗材：熒光 PCR 反應管、眼科剪、眼科鑷、生理鹽水、1.5 mL 經焦碳酸二乙酯（DEPC）水
處理的滅菌離心管、吸頭（10 µL、200 µL、1000 µL）、滅菌雙蒸水。
具有下列特點：
1.即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板，操作簡單，定量準確快速。
2. 引物經過優化，特異性強。預期的 PCR 產物長度為 560 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽性對照，便于分析試驗結果。
以下是大片吸蟲通用探針法熒光定量PCR檢測試劑盒的相關產品：
5,5-二氧基-1,2,3,4-四環戊二烯30%ACRYLAMIDE-BIS（19:1）溶液
2--6-氟苯酚30%ACRYLAMIDE-BIS（29:1）溶液
3,4-二-6-硝基三氟苯30%ACRYLAMIDE-BIS（37.5:1）溶液
2-戊基吡啶40%ACRYLAMIDE溶液
2-喹唑啉2%BIS-ACRYLAMIDE溶液
二基二硫醚3%蛋白電泳聚集預制膠溶液
二基三硫6%蛋白電泳分離預制膠溶液
2-巰基-5-苯并噻唑8%蛋白電泳分離預制膠溶液
苯并噻唑-2-醛10%蛋白電泳分離預制膠溶液
N-基吲哚15％蛋白電泳分離預制膠溶液
5-基-6,7-二-5H-環戊并吡嗪5%蛋白電泳聚集預制膠溶液
4-氧基苯醇酸酯低分子蛋白標準樣
大片吸蟲通用探針法熒光定量PCR檢測試劑盒2,2,3-三醛高分子蛋白標準樣
1,3-雙(2,4-二氨基苯氧基)烷等電聚焦蛋白電泳（IEF）2倍上樣緩沖液
4-三氟氧基酰苯胺等電聚焦蛋白電泳（IEF）10倍陽極電泳緩沖液型肝炎病PCR檢測試盒低溫運輸，-20℃保存50T
型副傷寒沙門菌PCR檢測試盒低溫運輸，-20℃保存50T
酰胺嘧啶 [fapy]-DNA 糖基化酶FPG（Formamidopyrimidine DNA Glycosylase）-20℃保存500U
酰胺，PCR級Formamide，PCR Grade-20℃保存5mL
酰胺Formamide 4℃保存100mL
基纖維素Methyl Cellulose室溫干燥保存25g
基綠Methyl Green室溫干燥保存1g
基化專一性PCR試盒Methylation Specific PCR Kit常溫保存（PCR MagicMix 2.0需要-20℃保存）50次
基紅Methyl Red室溫陰涼干燥保存5g
基橙Methyl Orange室溫干燥保存5g