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技術文章

紫外檢測儀

閱讀:1982          發布時間:2019-7-17

儀器簡介:

應用范圍:

高性能雙光束紫外檢測儀,適用于生物化學、合成化學、天然產物、藥物開發、食品化學、農業化學、化妝品、聚合物與石化等行業的科研與制備。可進行離子交換層析、親和層析 凝膠過濾層析、疏水作用層析等方法,用于 蛋白質、酶、核酸、核苷酸、多肽、(含/不含芳香族氨基酸)及其它任何有紫外吸收的生物/非生物樣品的分離分析、流動檢測,是生物分子純化的理想選擇。


主要特點:

我公司生產的高性能雙光束核酸蛋白紫外檢測儀與市場上單光束核酸蛋白紫外檢測儀比較:

一、光源不同、單色性精度達99。9%

二、光路不同,穩定性時間小于20 分鐘內。

三、價格一樣,性價比高

 

核酸與蛋白測試原理

蛋白質分子中含有共軛雙鍵的酪氨酸、色氨酸等芳香族氨基酸。它們具有吸收紫外光的性質,其吸收高峰在280nm波長處,且在此波長內吸收峰的光密度值與其濃度成正比關系,故可作為蛋白質定性、定量測定的依據,正因為如此,280nm處的紫外吸收法通常被用于層析系統中蛋白質濃度的連續監控。但由于各種蛋白質的酪氨酸和色氨酸的含量不同,故要準確定量,必需要有待測蛋白質的純品作為標準來比較,或且已經知道其消光系數作為參考。另外,不少非蛋白物質在280nm波長下也有—定吸收能力,可能發生干擾。其中尤以核酸(嘌呤和嘧啶堿)的影響更為嚴重。在280nm處的吸收比蛋白質強10倍(每克),但核酸在254nm處的吸收更強,其吸收高峰在254nm附近。核酸254nm處的消光系數是280nm處的2倍,而蛋白質則相反,280nm紫外吸收值大于254nm的吸收值。通常:
純蛋白質的光吸收比值:A280/A254 >> 1.8
純核酸的光吸收比值: A280/A254 << 0.5
因此蛋白質溶液中同時存在核酸時(生物體系大多數如此),必須同時測定OD254nm,與OD280nm。然后根據兩種波長的吸收度的比值,通過經驗公式校正,以消除核酸的影響而推算出蛋白質的真實含量。
蛋白質濃度=1.45×A280-0.74×A254 (mg/ml)
此經驗公式是通過一系列已知不同濃度比例的蛋白質(酵母烯醇化酶)和核酸(酵母核酸)的混合液所測定的數據來建立的。

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

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