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F- λ- fhuA2[lon] ompT lacZ::T7gene1 gal sulA11Δ(mcrC-mrr)114::IS10R(mcr-73::miniTn10-TetS)2 R(zgb-210::Tn10)(TetS) endA1 [dcm]
High5TM系列 ER2566感受態細胞為lon 和 ompT蛋白酶缺陷菌株。
膜外蛋白酶OMPT的缺失能夠有效防止表達的異源目的蛋白在細菌體內的降解。
High5TM系列 ER2566感受態細胞采用特殊化學試劑制作,可用于DNA的化學轉化,經pUC19質粒檢測轉化效率達108cfu/μg。
1. 取100μl冰上融化的ER2566感受態細胞,加入目的質粒并輕輕混勻,冰上靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動會降低轉化效率。
3. 向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養基(2YT或LB),混勻后37℃,200rpm復蘇60分鐘。
4. 5000rpm離心一分鐘收菌,留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上。
5. 將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。
1. 感受態細胞在冰上融化。
2. 混入質粒時應輕柔操作。
3. 轉化高濃度的質粒可相應減少終用于涂板的菌量。
4. 誘導時,IPTG濃度可選(0.1-2mM均可)。
5. 為獲得需要量的蛋白,誘導時間,溫度,IPTG濃度需實驗者優化。
上海淳麥生物科技有限公司 感受態細胞培養專家 4006815880
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