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比色法檢測生物素/蛋白質摩爾質量比

2023-4-26 閱讀(247)

1.吸取900 ul HABA/親和素溶液于1ml比色杯。
2.測定該溶液在500 nm 處的吸收值并記錄為“A500 HABA/Avidin"。
3.吸取100 ul 生物素標記的蛋白于杯中并測定500 nm 的吸光度值,記為A500 HABA/Avidin/Biotin (數值必須恒定15s 以上)如果A500 HABA/Avidin/Biotin的值不超過(≤)0.3,重新稀釋待測樣品并檢測。
注:計算結果時必須考慮稀釋度。
計算Biotin/Protein摩爾比:
①A=生物素化的蛋白毫摩爾濃度=蛋白濃度(mg/ml)/蛋白的分子量
②B=500nm處的吸光度變化
△A500=(0.9×A500HABA/Avidin)-A500HABA/Avidin/Biotin
③C=生物素的毫摩爾濃度=mmol Biotin/ml反應溶液=△A500/(34,000×光程)
④Biotin/Protein摩爾比=C•10•稀釋倍數/




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