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艾美捷CompTech丨40 %甘油中的C1q蛋白功能和測定

時間:2023/3/3閱讀:85
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艾美捷CompTech40 %甘油中的C1q蛋白:

名稱: 40 %甘油中的C1q蛋白

編號: A100

規(guī)格: 1000 µg/vial

濃度: 1.0 mg/mL (實際濃度見分析證書)

類型 冷凍液體

活動: > 1,000,000 C1H50 units/mg

純度: > 98%的SDS頁面

緩沖區(qū): 40%甘油,10 mM HEPES,300 mM氯化鈉,pH 7。2

消缺系數。 A28 0 nm = 為 0 . 6 8 , 1 . 0 m g/m l

分子量: 410000Da ( 18鏈)

防腐劑: 無,0.22µm過濾。

存儲: - 7 0oC或以下。避免凍融。

根源 正常的人類血清 (經認證的HBsAg、HTLV-I/II、STS和HCV、 HIV1和HIV-II抗體檢測均為陰性) 。

預防措施 在處理人類血液制品時要采取常規(guī)的預防措施。

般說明

C1rC1以及其他穩(wěn)定蛋白中分離出來的C1q往往很容易聚集。由于它在 多研究實驗室中被分離和研究,許多緩沖液被用于穩(wěn)定濃縮的C1q和防止聚集。大約 一半的科學家喜歡高鹽,另一部分科學家喜歡儲存緩沖液中40%的甘油。因此    CompTech在高緩沖液A099和高鹽緩沖液A100加40%甘油中均銷售1 mg/mLC1q)。 該公司有檢測到在功能活性、存儲穩(wěn)定性或聚集性方面的可測量的差異,但在研 界仍然存在強烈的偏好。

C1q是從正常人血漿中純化出來的。C1qC1復合物的一部分,該復合物是級 聯反中的第一個補體成分,稱為經典補體途徑。C1實際上是三種不同蛋白質 (C1C1rC1) 結合在鈣依賴復合物中的非共價組裝。C1q有6個延伸的臂,每個臂的末 都有一個結構域,與免疫球蛋白的Fc結構域結合。當抗體與抗原結合形成免疫復合 時,它們聚集在一起,使C1q的六個臂中的兩個或多個與抗體的Fc結構域結合,如 IgGIgM。多個臂與免疫復合物的結合導致復合物中的兩個C1r蛋白 (蛋白酶酶原)  動激活產生兩個C1r蛋白酶,切割并激活復合物中的兩個c1蛋白酶酶原。活化的C1解補體成分C4,釋放C4a,并啟動C4b與活化表面的共價附著在活化表面。激活的  C1s能切割C2,C2的較大片段與表面附著的C4b結合,形成C4bC2a,這是經典途徑 C3/C5轉化酶。

 

物理特性和結構

C1q個由18個多肽鏈組成的高分子量復合物。C1q的六個臂中的每一個都 包含三鏈,一條a鏈 (26000道爾頓) ,一條B鏈 (25000道爾頓) 和一條C鏈 (2400 0爾頓) 。這三條鏈被卷曲成類膠原蛋白


三螺旋結構大約超過其一半的長度。這個膠原蛋白區(qū)域的一半形成了一個中心核心, 在這里有的18條鏈聚集在一起。這些鏈通過A-BC-C模式中的二硫化物連接在這個 核心中在膠原蛋白區(qū)域的中心有一個彎曲,使手臂彼此向外伸展。膠原臂遠端的球 頭具有免疫球蛋白Fc結構域的結合位點。

C1復合物由一個C1q分子 (410000道爾頓) 、兩個C1r分子 (92000道爾頓) 和 兩個C1s子 (86000道爾頓) 組成。該復合物在鈣的存在下是穩(wěn)定的,但如果鈣被去 除,很容易解離。當C1被激活時,C1rC1s亞基由于蛋白水解激活而分別分裂成兩 鏈分子。因此,C1的SDS凝膠圖樣非常復雜

C1q的生物學功能在上述一般描述和物理特性部分中描述。C1q的功能活性可以 C1q耗盡的血清 (CompTech #A300) 和EA細胞 (CompTech #B200) 來檢測。這些檢 測方法C1q極其敏感,在測量EA細胞裂解的檢測方法中,通常產生50%的裂解,小于 2 ng的裂解(DoddsAW.和SimRB. (1997) ;摩根,BP.

(2000)).

 

測定

經典途徑活性的單位是CH50。一個類似的單元,C1qH50,被用來定量C1q 性。一C1qH50單元是溶解3 x 10的50%所需的功能性C1q的量7當一定量的C1q (Comp Tech #A099或A100) 與5-20µLC1q-DplGVB中孵育時,EA細胞 (抗體致敏的綿羊紅 細胞 (CompTech #B200) ) ++ (比較技術#B100) ,總體積為500µL,30 min,37    minoC.這個數量的C1q表明了對C1q檢測的敏感性,通常為1 ng C1q與10µL C1q-Dpl  (DoddsAW.和SimRB. (1997) ;摩根,BP. (2000)).有關批次的具體值 參見分析證書。

用程序

C1q覆蓋ELISA板,以捕獲和定量臨床樣本中的免疫復合物。許多商業(yè)公司 銷售用于免疫復合物檢測和定量的診斷試劑盒。這些試劑盒是基于C1q與免疫復合 良好結合的能力,但不與單體免疫球蛋白的顯著結合。

參考文獻

Dodds, A.W. and Sim, R.B. editors (1997) Complement. A Practical Approach (ISBN 019963539) Oxford University Press, Oxford.

Morgan, B.P. ed. (2000) Complement Methods and Protocols. (ISBN 0-89603-654-5) Humana Press, Inc., Totowa, New Jersey.

Ross, G.D. (1986) Immunobiology of the Complement System. (ISBN 0-12-5976402) Academic Press, Orlando.

Rother, K., Till, G.O., and H?nsch, G.M. (1998) The Complement System. (ISBN 3-540-61894-5) Springer-Verlag, Heidelberg.


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