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土壤DNA提取很難嗎?艾美捷土壤DNA提取試劑盒一“盒”解決

時間:2021/8/13閱讀:405
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土壤的成分包括礦物質、粘土等無機物、植物及植物的yi體、腐殖物質等土壤有機物以及在土壤中存在的微生物。

 

提取的難點:

 

從土壤中提取的DNA,是微生物、動植物yi體等的總DNA,同時,腐殖物質的性質與DNA很相似,DNA提取過程中會將腐殖等物質一起純化,采用傳統的DNA提取方法來除去腐殖物質等抑制因子是十分困難的。而這些腐殖物質會抑制聚合酶鏈式反應(PCR)及限制性酶切等。因而,從土壤中提取DNA,腐殖物質等抑制因子的除去干凈是重中之重。某公司根據腐殖物質等特點,發明了高效的腐殖酸吸附劑,再與硅膠柱純化的技術結合,開發出了高效土壤DNA提取試劑盒(SoilDNAKit),已為廣大客戶所采用,*替代價格昂貴的進口產品。

 

原理與操作:

 

土壤樣品加入懸浮緩沖液Buffer C1,并加入玻璃珠與zhuanli的腐殖酸吸附劑Buffer C2,渦旋使土壤充分重懸,腐殖物質充分釋放,讓吸附劑有效吸附腐殖酸。再加入高效的裂解液Buffer C3并渦旋在玻璃珠的摩擦作用下,裂解土壤中的所有生物包括G+細菌、酵母菌、真菌、藻類、線蟲甚至真細菌的孢子、芽孢、動植物yi體等,游離DNA。之后,再加入沉淀劑Buffer C4,離心沉淀除去土壤殘渣、吸附有腐殖酸的吸附劑、多糖多酚、絕大部分的色素等,獲得清亮的、含有DNA的上清,上清加入異丙醇沉淀獲得DNA粗品。粗品中加入ddH2O溶解后,再加入Buffer C5離心進一步除去腐殖酸等雜質,獲得上清,往上清加入乙醇后轉移到硅膠純化柱中過柱吸附DNA,除去雜質。再加入漂洗液Buffer WB離心進一步除去蛋白質、腐殖酸等雜質,加入漂洗液DNA Wash Buffer除去鹽分等。干燥柱子后加入滅菌去離子水后,離心獲得高純的DNA

 

艾美捷土壤DNA提取試劑盒樣品使用量與DNA產出數據參考:

土壤zui大上樣量:250mg

處理的土壤類型:所有土壤類型

純化柱zui大結合載量:50 ug

純化柱-zui大液體輸入體積:650 uL

10個樣品的純化時間:30 minutes

 

64000土壤DNA提取試劑盒測試:

1.png

用Real-time PCR來確認提取的DNA是否有高質量。使用Norgen的土壤DNA提取試劑盒(貨號:64000)和Competitor M的試劑盒,從250mg粘土(含有低腐殖酸)和表層土壤(含有高腐殖酸)樣品中分離出土壤DNA。使用4 µL土壤DNA(總PCR反應體積為20 µL)進行Real-time PCR,檢測來自不同土壤樣品的16s rDNA。與Competitor M的樣品(綠線)相比,NorgenDNA樣品(紅線)的較早的Ct值表明下游應用的土壤DNA質量更高。


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