——高效、高純度基因組DNA提取的標準化解決方案
一、產品原理與核心優勢
1.1 技術原理
硅膠膜離心柱技術：
選擇性結合DNA（>100 bp），高效去除蛋白質、RNA及小分子污染物
基于pH調控的吸附/洗脫機制（裂解液pH=8.0，洗脫液pH=8.5）
關鍵步驟：
細胞裂解（蛋白酶K+Buffer ATL）
核酸吸附（Buffer AL+乙醇）
雜質去除（Buffer AW1/AW2洗滌）
DNA洗脫（Buffer AE或水）
1.2 性能參數
指標 Qiagen 51304 傳統酚-氯仿法
得率（哺乳動物細胞） 5-10 μg/10? cells 3-8 μg/10? cells
A260/A280 1.7-1.9 1.6-1.8（常含酚殘留）
操作時間 20-30分鐘 2-3小時
最大樣本量 5×10? cells或25 mg組織 需分多次處理
1.3 適用樣本類型
推薦樣本：
? 培養細胞（貼壁/懸浮）
? 動物組織（肝、脾等軟組織優先）
? 血液（需配合紅細胞裂解步驟）
不推薦樣本：
? 植物組織（需專用試劑盒）
? 石蠟包埋樣本（需脫蠟預處理）
二、標準化操作流程
2.1 實驗前準備
試劑預冷：Buffer AW1/AW2需4℃保存，使用前室溫平衡
樣本預處理：
復制
貼壁細胞：胰酶消化后PBS重懸
組織樣本：液氮研磨至粉末狀
2.2 詳細操作步驟
復制
1. 裂解：
- 加20 μL蛋白酶K + 200 μL Buffer ATL
- 56℃孵育10分鐘（組織需延長至30分鐘）
2. 結合：
- 加200 μL Buffer AL + 200 μL乙醇（96-100%）
- 渦旋混勻15秒
3. 過柱：
- 轉移混合液至離心柱，≥6000 g離心1分鐘
4. 洗滌：
- 加500 μL Buffer AW1，離心1分鐘
- 加500 μL Buffer AW2，離心3分鐘（確保去鹽）
5. 洗脫：
- 加50-100 μL Buffer AE，室溫靜置5分鐘后離心
2.3 關鍵優化點
提高得率：
延長組織裂解時間至2小時
二次洗脫（使用同一洗脫液）
提高純度：
增加AW2洗滌離心至5分鐘
洗脫前空離2分鐘去除殘留乙醇
三、質量評估與問題排查
3.1 質檢標準
純度合格：A260/A280=1.7-1.9，A260/A230>2.0
完整性驗證：
? 0.8%瓊脂糖凝膠電泳，主帶>10 kb（無拖尾）
? 適用于PCR、Southern blot等下游應用
3.2 常見問題診斷
現象 可能原因 解決方案
得率低 /乙醇比例錯誤 增加蛋白酶K用量/檢查乙醇濃度
A260/A280異常 蛋白質或酚殘留 增加AW2洗滌步驟
DNA降解 樣本反復凍融/RNase污染 使用新鮮樣本/添加RNase抑制劑
3.3 應用案例數據
案例1：小鼠尾尖基因分型
結果對比：
復制
Qiagen 51304：平均得率8.2 μg，PCR成功率98%
CTAB法：平均得率5.1 μg，PCR成功率85%
案例2：FFPE樣本提取
優化方案：
增加蛋白酶K至40 μL，裂解過夜
得率提升3倍（從0.5 μg至1.5 μg/10 μm切片）
四、技術問答（Q&A）
Q1：能否用于微量樣本（<10? cells）？
需配合 載體RNA（如Qiagen 1017456） 提高回收率（建議終濃度5 ng/μL）
Q2：洗脫緩沖液選擇建議？
Buffer AE：含EDTA，適合長期儲存（-20℃）
無菌水：適用于立即使用的PCR等應用
文檔優化建議：
插入 【電泳檢測示例圖】 標注完整性與降解DNA區別
添加 得率計算工具 二維碼（鏈接至在線計算器）
關鍵步驟用 ??注意 標注（如"勿讓離心柱干燥"）
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