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激光誘導熒光檢測器的組成（一）
激光器
激光器是激光誘導熒光檢測器的重要組成部分。
激光作為熒光檢測器的理想光源，是因為它具有區別于普通光源的特性：
①單色性好，譜線寬度可達123 9 ’5 以下，使溶劑的瑞利散射光和拉曼散射光的帶寬降為1:2’5（拉曼散射光的固有帶寬），因而可選擇性地消除散射光對熒光信號的干擾。
②聚光性強，激光光束的發散角極小，可將激光束聚焦成直徑幾微米的光點，能量高度集中，因而可以使液相色譜檢測池體積減小，特別適用于目前正在發展的微型和毛細管液相色譜。
③重要的特性就是光子流量高，也就是亮度高，大大增強了光源的信號，從而顯著提高分析靈敏度。
另外，用脈沖激光為光源，采用時間分辨技術可消除瑞利散射光和拉曼散射光對測定的干擾，同時增加被測成分之間測定的選擇性。以上這些特性使激光誘導熒光檢測器的信噪比大大增強，顯示出高的靈敏度和較好的選擇性。
激光器的種類很多，已有數百種材料可以用來制造激光器，如氣體、晶體或玻璃、半導體和有機材料等，分別稱做氣體激光器、固體激光器、半導體激光器和有機染料激光器。此外，利用一定的裝置，可以使染料激光器發射出來的激發波長做連續的變化，這種激光器稱為可調諧激光器。半導體激光器和有機染料激光器都可用于可調諧激光器。一般激光器僅為線性光譜光源，可調諧激光器因為所發出的激發波長可以連續改變，所以作為光源具有區別于其它激光器的明顯優點。激光器按發光方式的不同，可分為連續波和脈沖波激光器。連續波激光器具有良好的空間模式和空間指向性，功率輸出變動小于1%，而脈沖波激光器空間模式較差，功率輸出變動可達10%以上。
用于液相色譜檢測器的激光器的選擇主要按以下原則：
①由于大多數激光器的發射光譜僅為一些分立的譜線，激光發射波長必須與所分析組分的吸收光譜相適合。如果需要進行熒光衍生反應，只需選擇與熒光衍生試劑吸收相應的激發波長即可對所有組分進行高靈敏檢測。此外，在選擇激光器時還要考慮溶劑拉曼散射的影響。可通過選擇激光器的激發波長或熒光衍生試劑使被測組分的熒光發射避開水的拉曼散射光（水的拉曼散射譜帶為270.2nm-322.5nm和606.06nm)。
②激光器要有良好的空間模式和空間指向性。
③激光器要有穩定的功率輸出。激光輸出功率的穩定性直接影響檢測器的靈敏度。輸出功率越穩定，檢測器的噪聲越小，信嗓比越高。
④選擇適當功率的激光器。通常，提高激光激發功率，熒光信號和背景噪聲都會增強，但熒光強度與激光照射功率成正比，背景短的噪聲則與激光照射功率的平方根成正比。因此，從提高信噪比的角度，宜選擇功率較大的激光器。但另一方面，隨著照射功率的增強又會產生熒光飽和、熒光分子的光解、檢測池熱效應和基體背景熒光增加等不利因素，不可能無限度提高信噪比。因此必須綜合考慮各種因素的影響。
目前，熒光檢測器常用的激光器有：He-Cd激光器、Ar離子激光器、Kr離子激光器、He-Ne激光器等。He-Cd連續波激光器是常用的LIF激光器，它在325nm和442nm處均有很好的熒光衍生試劑與之匹配，但是HE-Cd激光管的壽命較短，輸出穩定性受環境影響較大，影響分析檢測靈敏度。Ar離子激光器和Kr離子激光器在270nm左右的紫外輸出可以使熒光效率很低的分子產生熒光，如某些含芳香環的蛋白質、多肽、氨基酸分子等。但具有紫外輸出的激光器體積較大、能耗高，價格昂貴。小功率的Ar離子激光器具有輸出功率穩定、體積小、價格較低等特點而被較多的激光誘導熒光檢測系統采用，其主要輸出波長為488nm和514nm。近年來，He-Ne激光器也常用于熒光檢測器中。
半導體激光器又稱二極管激光器，由于具有功率輸出穩定、價格便宜、體積小、使用壽命長等優點，成為激光誘導熒光檢測器的理想光源。近些年來，半導體激光技術得到很大發展。但是，商品半導體激光器的發射波長多在遠紅外區，短波長范圍在650nm-900nm之間的近紅外區。雖然近紅外區的背景熒光和拉曼散射的干擾小，樣品的光解少，但在此波長范圍內，很難找到與其相適合的熒光衍生化試劑，故發展前景不大。目前，生產廠商都在發展紫外半導體激光器，以期得到普遍應用。