美國(guó) Biozellen-3D 細(xì)胞培養(yǎng)凝膠試劑盒 2025 版詳細(xì)介紹

產(chǎn)品基本信息

本公司今日?qǐng)?bào)道：

• 中文名稱：3D 細(xì)胞培養(yǎng)凝膠試劑盒

• 英文名稱：3D cell culture      Kit

• 貨號(hào)：KC7186

• 保存條件：室溫

產(chǎn)品概述

本 3D 細(xì)胞培養(yǎng)凝膠試劑盒所包含的生物活性凝膠，能夠高度模擬活體內(nèi)三維組織的微環(huán)境與形態(tài)結(jié)構(gòu)。它為細(xì)胞的體外培養(yǎng)以及體內(nèi)實(shí)驗(yàn)提供了近似于體內(nèi)細(xì)胞外基質(zhì)的三維立體微環(huán)境，有力支持各種細(xì)胞的三維生長(zhǎng)。

該凝膠的主要成分是多糖和人工多肽，具有諸多顯著優(yōu)勢(shì)。其不含抗原物質(zhì)和動(dòng)物源性成分，從根本上杜絕了免疫原性的風(fēng)險(xiǎn)。產(chǎn)品成分穩(wěn)定且明確，批次間差異極小，這使得實(shí)驗(yàn)具有ji高的可重復(fù)性。

在操作方面，本產(chǎn)品極為簡(jiǎn)便。僅需在室溫下操作，無需像其他產(chǎn)品那樣在冰上進(jìn)行復(fù)雜的處理。而且，它可以直接使用，無需進(jìn)行稀釋或額外添加其他成分。僅需簡(jiǎn)單的 2 個(gè)步驟，經(jīng)過 5-10 分鐘的孵育，即可成功形成細(xì)胞 - 凝膠的三維結(jié)構(gòu)。

此外，該凝膠對(duì)剪切力敏感，能夠直接進(jìn)行體內(nèi)原位注射，無論是與細(xì)胞混合還是不混合的情況下，都能無縫對(duì)接體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)，為開展動(dòng)物實(shí)驗(yàn)提供了極大的便利。細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)束后，還可回收培養(yǎng)。試劑盒附贈(zèng)溫和裂解液，裂解或降解后的成分僅為單糖和氨基酸，對(duì)細(xì)胞無任何不良影響。

從觀察角度來看，該凝膠具有高透光性和高通透性的特點(diǎn)，方便研究人員通過熒光觀察、顯色觀察等多種方式對(duì)細(xì)胞進(jìn)行實(shí)時(shí)跟蹤觀察。

操作說明書

1. 預(yù)熱凝膠液：使用前，將凝膠液預(yù)熱至 37℃，為后續(xù)與細(xì)胞懸液的混合做好準(zhǔn)備。

2. 混合凝膠液與細(xì)胞懸液：在離心管中，將凝膠液和細(xì)胞懸液輕輕混勻。可輕柔快速地進(jìn)行斡旋操作，時(shí)間控制在 1 分鐘內(nèi)，重復(fù) 1-2 次。特別注意，在凝膠和細(xì)胞混合時(shí)，必須嚴(yán)格按照說明書的要求，先吸取凝膠，再往凝膠中加入細(xì)胞懸液，然后進(jìn)行混勻，順序絕對(duì)不可顛倒。同時(shí)，斡旋時(shí)間不能超過 1 分鐘，斡旋次數(shù)不能超過 3 次，因?yàn)檫^度斡旋會(huì)破壞細(xì)胞膜，并增加凝膠中的氣泡，從而嚴(yán)重影響細(xì)胞培養(yǎng)效果。建議的終細(xì)胞濃度為 4.2x10^5/ml-1x10^6/ml。不同的培養(yǎng)體系可參照以下表格確定各成分的體積：
        | 孔板類型 | 凝膠液體積 | 細(xì)胞懸液體積 | 培養(yǎng)基體積 |
        | ---- | ---- | ---- | ---- |
        | 96 孔板 | 30ul / 孔 | 30ul      / 孔 | 80ul / 孔 |
        | 24 孔板 | 150ul / 孔 |      150ul / 孔 | 400ul / 孔 |
        | 12 孔板 | 300ul / 孔 |      300ul / 孔 | 800ul / 孔 |
        | 6 孔板 | 600ul / 孔 | 600ul      / 孔 | 1600ul / 孔 |

3. 潤(rùn)洗與鋪展：用 1xpbs 潤(rùn)洗細(xì)胞培養(yǎng)板，建議至少在凝膠形成前 20 分鐘進(jìn)行潤(rùn)洗操作。潤(rùn)洗后，快速將凝膠細(xì)胞混合物貼壁加入培養(yǎng)板中，并在四周輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)板，使凝膠細(xì)胞混合物均勻鋪展。

4. 凝膠形成：將培養(yǎng)板置于 37℃環(huán)境下孵育 5-30 分鐘，以形成穩(wěn)定的凝膠結(jié)構(gòu)。

5. 添加培養(yǎng)液與培養(yǎng)：孵育完成后，沿孔壁緩慢加入培養(yǎng)液。隨后，將培養(yǎng)板置于 37℃、5% CO2 的條件下培養(yǎng) 24 小時(shí)。在此期間，應(yīng)避免晃動(dòng)培養(yǎng)板，以免破壞凝膠結(jié)構(gòu)。

6. 換液操作：24 小時(shí)后進(jìn)行半換液操作，即用移液槍輕輕吸取上層細(xì)胞培養(yǎng)液的 1/2，再添加等量的新鮮培養(yǎng)液。此后，可根據(jù)細(xì)胞的生長(zhǎng)情況進(jìn)行正常換液。特別注意，shou次換液時(shí)一定要緊貼培養(yǎng)孔壁，小心吸取，避免吸掉剛貼附好的細(xì)胞。

實(shí)驗(yàn)中可能出現(xiàn)的問題及解決方法

1. 氣泡問題：若在運(yùn)輸過程中出現(xiàn)氣泡，可將凝膠放置在 4℃冰箱中，氣泡可自行消除。如需快速消除氣泡，可采用微波加熱 30s 的方法。為避免在使用過程中產(chǎn)生氣泡，建議使用 1mL 無菌注射器（去針頭使用）輕吸凝膠注入 EP 管中，也可以使用經(jīng) PBS 潤(rùn)洗的 1mL 槍頭吸取凝膠，再將細(xì)胞懸液加入后上下輕輕吹打進(jìn)行混勻。

2. 細(xì)胞適應(yīng)問題：對(duì)于 2D 培養(yǎng)的細(xì)胞接種到凝膠中，通常需要 2-4 天的時(shí)間來適應(yīng)凝膠的三維環(huán)境。在這期間，細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)可能會(huì)比較保守，多呈圓形。之后，細(xì)胞會(huì)逐漸恢復(fù)正常生長(zhǎng)，可進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

3. 細(xì)胞遷移問題：為避免一些類型的細(xì)胞從凝膠中遷移到培養(yǎng)皿底部貼壁，在鋪板前，可先將孔板包被一層薄薄的凝膠。具體方法是將凝膠和培養(yǎng)液按照 1:1 的體積比配置，鋪在孔板底部，待其凝固之后，再鋪凝膠細(xì)胞混合液。

細(xì)胞收集與再培養(yǎng)

1. 回收凝膠中的細(xì)胞：棄掉培養(yǎng)液，并用裂解液沖洗培養(yǎng)孔板。加入凝膠液 5 倍體積的裂解液，輕輕吹打數(shù)次，在室溫下裂解約 10 分鐘，使凝膠wan全變成液體狀態(tài)。將混合液收集到離心管中，用 PBS 沖洗孔板，并將沖洗液也收集至上述離心管中。然后，以 1500 rpm      的轉(zhuǎn)速離心 3 分鐘，即可收集到細(xì)胞。如果細(xì)胞在凝膠內(nèi)是成團(tuán)生長(zhǎng)的，可以在裂解時(shí)適當(dāng)加大裂解液體積，并延長(zhǎng)裂解時(shí)間，以得到分散的單個(gè)細(xì)胞。

問題集

1. 3D 細(xì)胞培養(yǎng)后如何染色？
        答：3D 細(xì)胞培養(yǎng)后可以直接在膠中進(jìn)行染色，染色步驟與      2D 培養(yǎng)的細(xì)胞相同，不需要進(jìn)行特殊處理。

2. 3D 細(xì)胞培養(yǎng)后怎么觀察？
        答：3D 細(xì)胞培養(yǎng)后可以使用 Confocal 或者熒光倒置顯微鏡進(jìn)行觀察，光學(xué)顯微鏡也可以觀察，但是由于凝膠是立體結(jié)構(gòu)，可能光學(xué)顯微鏡觀察的效果不會(huì)太理想。

3. 你們的 3D 細(xì)胞培養(yǎng)凝膠能進(jìn)行培養(yǎng)嗎？
        答：可以。

4. 你們的 3D 細(xì)胞培養(yǎng)凝膠使用時(shí)需要使用配套的專用耗材或者儀器嗎？
        答：不需要使用專用耗材和儀器。采用本試劑盒進(jìn)行 3D 細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)所用的耗材和儀器同 2D 培養(yǎng)。

5. 你們的 3D 細(xì)胞培養(yǎng)凝膠試劑盒可以用于細(xì)胞共培養(yǎng)嗎？
        答：可以進(jìn)行細(xì)胞共培養(yǎng)。

6. 你們的 3D 培養(yǎng)凝膠試劑盒是不是只能培養(yǎng)特定的一些細(xì)胞？
        答：本試劑盒對(duì)細(xì)胞沒有選擇性，對(duì)大多數(shù)細(xì)胞都是適用的。

7. 你們的 3D 培養(yǎng)凝膠試劑盒和 Matrigel 基質(zhì)膠有何不同？
        答：Matrigel 基質(zhì)膠主要是由層粘連蛋白、Ⅳ 型膠原、巢蛋白、硫酸肝素糖蛋白等組成，是從腫瘤中提取出來的，成分復(fù)雜。本試劑盒凝膠主要是由多肽和多糖構(gòu)成，為全人工合成的，無動(dòng)物源性。適用 Matrigel 基質(zhì)膠進(jìn)行 3D 培養(yǎng)，其后期染色非常困難，細(xì)胞也無法回收。使用本試劑盒進(jìn)行 3D 培養(yǎng)后的細(xì)胞可以輕松染色，并可以在保持細(xì)胞活性的情況下回收細(xì)胞，是您      3D 培養(yǎng)的理想選擇。

8. 你們的 3D 培養(yǎng)凝膠和軟瓊脂一樣嗎？
        答：我們的 3D 培養(yǎng)凝膠是人工合成的，其性能大大優(yōu)于軟瓊脂。

9. 凝膠和細(xì)胞懸液混合這一步，是否有順序要求？
        答：有。必須嚴(yán)格按照說明書，先吸取凝膠到容器中，再往凝膠中加入細(xì)胞懸液，混勻。順序不可顛倒。否則不利于形成穩(wěn)定的凝膠結(jié)構(gòu)。

10. 使用中如何吸取凝膠？
         答：先將槍頭jian端剪掉，用 PBS 潤(rùn)洗，然后再吸取凝膠。慢慢松開移液槍的按鈕，按鈕彈回原位之后，讓槍頭在凝膠液面以下稍多停留一會(huì)兒，再提槍，轉(zhuǎn)移凝膠到其他容器中。

11. 吸取凝膠與混勻凝膠過程中，產(chǎn)生的氣泡可否消除？
         答：吸取與混勻凝膠過程中產(chǎn)生的氣泡不能消除，會(huì)影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)，所以，應(yīng)盡量避免氣泡產(chǎn)生。

12. 怎樣達(dá)到更好的鋪板效果？
         答：鋪板前，采用分區(qū)域逐滴滴加的方式，把每一滴凝膠按一定排布次序滴在孔（或皿）的不同區(qū)域，滴好之后，用槍頭在凝膠表面輕輕引流，可獲得較為均勻的鋪板結(jié)果。鋪板后將培養(yǎng)板靜置孵育 5-30min，期間不要晃動(dòng)培養(yǎng)板。

13. 何時(shí)shou次添加培養(yǎng)液？
         答：37℃恒溫培養(yǎng)箱中孵育 5-30min 形成穩(wěn)定凝膠結(jié)構(gòu)后即需要添加培養(yǎng)液。將培養(yǎng)液貼壁緩慢加入孔板中。

14. 培養(yǎng)過程中需要如何換液？
         答：換液時(shí)注意先將負(fù)壓泵壓力調(diào)低。最好在培養(yǎng) 48 小時(shí)之后再進(jìn)行shou次換液。換液時(shí)，棄掉 2/3 左右的舊液即可，留少量舊液以避免吸走凝膠；對(duì)于生長(zhǎng)快的細(xì)胞，24h 時(shí)可以換掉一半培養(yǎng)液。shou次換液時(shí)一定要緊貼培養(yǎng)孔壁，小心緩慢吸取舊液，避免吸掉剛貼附好的細(xì)胞。添加新液一定要貼壁、緩慢加入，以避免沖壞凝膠。此后可根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)速度，視培養(yǎng)液的消耗情況來換液。