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上海徠同生物科技有限公司

美國(guó) Biozellen-3D 細(xì)胞培養(yǎng)凝膠試劑盒 2025 版詳細(xì)介紹

時(shí)間:2025-2-20閱讀:133
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美國(guó) Biozellen-3D 細(xì)胞培養(yǎng)凝膠試劑盒 2025 版詳細(xì)介紹

產(chǎn)品基本信息

本公司今日?qǐng)?bào)道:

  • 中文名稱3D 細(xì)胞培養(yǎng)凝膠試劑盒

  • 英文名稱3D cell culture      Kit

  • 貨號(hào)KC7186

  • 保存條件:室溫

產(chǎn)品概述

 

3D 細(xì)胞培養(yǎng)凝膠試劑盒所包含的生物活性凝膠,能夠高度模擬活體內(nèi)三維組織的微環(huán)境與形態(tài)結(jié)構(gòu)。它為細(xì)胞的體外培養(yǎng)以及體內(nèi)實(shí)驗(yàn)提供了近似于體內(nèi)細(xì)胞外基質(zhì)的三維立體微環(huán)境,有力支持各種細(xì)胞的三維生長(zhǎng)。

 

該凝膠的主要成分是多糖和人工多肽,具有諸多顯著優(yōu)勢(shì)。其不含抗原物質(zhì)和動(dòng)物源性成分,從根本上杜絕了免疫原性的風(fēng)險(xiǎn)。產(chǎn)品成分穩(wěn)定且明確,批次間差異極小,這使得實(shí)驗(yàn)具有ji高的可重復(fù)性。

 

在操作方面,本產(chǎn)品極為簡(jiǎn)便。僅需在室溫下操作,無需像其他產(chǎn)品那樣在冰上進(jìn)行復(fù)雜的處理。而且,它可以直接使用,無需進(jìn)行稀釋或額外添加其他成分。僅需簡(jiǎn)單的 2 個(gè)步驟,經(jīng)過 5-10 分鐘的孵育,即可成功形成細(xì)胞 - 凝膠的三維結(jié)構(gòu)。

 

此外,該凝膠對(duì)剪切力敏感,能夠直接進(jìn)行體內(nèi)原位注射,無論是與細(xì)胞混合還是不混合的情況下,都能無縫對(duì)接體內(nèi)外實(shí)驗(yàn),為開展動(dòng)物實(shí)驗(yàn)提供了極大的便利。細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)束后,還可回收培養(yǎng)。試劑盒附贈(zèng)溫和裂解液,裂解或降解后的成分僅為單糖和氨基酸,對(duì)細(xì)胞無任何不良影響。

 

從觀察角度來看,該凝膠具有高透光性和高通透性的特點(diǎn),方便研究人員通過熒光觀察、顯色觀察等多種方式對(duì)細(xì)胞進(jìn)行實(shí)時(shí)跟蹤觀察。

操作說明書



  1. 預(yù)熱凝膠液:使用前,將凝膠液預(yù)熱至 37℃,為后續(xù)與細(xì)胞懸液的混合做好準(zhǔn)備。

  2. 混合凝膠液與細(xì)胞懸液:在離心管中,將凝膠液和細(xì)胞懸液輕輕混勻。可輕柔快速地進(jìn)行斡旋操作,時(shí)間控制在 1 分鐘內(nèi),重復(fù) 1-2 次。特別注意,在凝膠和細(xì)胞混合時(shí),必須嚴(yán)格按照說明書的要求,先吸取凝膠,再往凝膠中加入細(xì)胞懸液,然后進(jìn)行混勻,順序絕對(duì)不可顛倒。同時(shí),斡旋時(shí)間不能超過 1 分鐘,斡旋次數(shù)不能超過 3 次,因?yàn)檫^度斡旋會(huì)破壞細(xì)胞膜,并增加凝膠中的氣泡,從而嚴(yán)重影響細(xì)胞培養(yǎng)效果。建議的終細(xì)胞濃度為 4.2x10^5/ml-1x10^6/ml。不同的培養(yǎng)體系可參照以下表格確定各成分的體積:
         |
    孔板類型 | 凝膠液體積 | 細(xì)胞懸液體積 | 培養(yǎng)基體積 |
         | ---- | ---- | ---- | ---- |
         | 96
    孔板 | 30ul / | 30ul      / | 80ul / |
         | 24
    孔板 | 150ul / |      150ul / | 400ul / |
         | 12
    孔板 | 300ul / |      300ul / | 800ul / |
         | 6
    孔板 | 600ul / | 600ul      / | 1600ul / |

  3. 潤(rùn)洗與鋪展:用 1xpbs 潤(rùn)洗細(xì)胞培養(yǎng)板,建議至少在凝膠形成前 20 分鐘進(jìn)行潤(rùn)洗操作。潤(rùn)洗后,快速將凝膠細(xì)胞混合物貼壁加入培養(yǎng)板中,并在四周輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)板,使凝膠細(xì)胞混合物均勻鋪展。

  4. 凝膠形成:將培養(yǎng)板置于 37℃環(huán)境下孵育 5-30 分鐘,以形成穩(wěn)定的凝膠結(jié)構(gòu)。

  5. 添加培養(yǎng)液與培養(yǎng):孵育完成后,沿孔壁緩慢加入培養(yǎng)液。隨后,將培養(yǎng)板置于 37℃5% CO2 的條件下培養(yǎng) 24 小時(shí)。在此期間,應(yīng)避免晃動(dòng)培養(yǎng)板,以免破壞凝膠結(jié)構(gòu)。

  6. 換液操作24 小時(shí)后進(jìn)行半換液操作,即用移液槍輕輕吸取上層細(xì)胞培養(yǎng)液的 1/2,再添加等量的新鮮培養(yǎng)液。此后,可根據(jù)細(xì)胞的生長(zhǎng)情況進(jìn)行正常換液。特別注意,shou次換液時(shí)一定要緊貼培養(yǎng)孔壁,小心吸取,避免吸掉剛貼附好的細(xì)胞。

實(shí)驗(yàn)中可能出現(xiàn)的問題及解決方法



  1. 氣泡問題:若在運(yùn)輸過程中出現(xiàn)氣泡,可將凝膠放置在 4℃冰箱中,氣泡可自行消除。如需快速消除氣泡,可采用微波加熱 30s 的方法。為避免在使用過程中產(chǎn)生氣泡,建議使用 1mL 無菌注射器(去針頭使用)輕吸凝膠注入 EP 管中,也可以使用經(jīng) PBS 潤(rùn)洗的 1mL 槍頭吸取凝膠,再將細(xì)胞懸液加入后上下輕輕吹打進(jìn)行混勻。

  2. 細(xì)胞適應(yīng)問題:對(duì)于 2D 培養(yǎng)的細(xì)胞接種到凝膠中,通常需要 2-4 天的時(shí)間來適應(yīng)凝膠的三維環(huán)境。在這期間,細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)可能會(huì)比較保守,多呈圓形。之后,細(xì)胞會(huì)逐漸恢復(fù)正常生長(zhǎng),可進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

  3. 細(xì)胞遷移問題:為避免一些類型的細(xì)胞從凝膠中遷移到培養(yǎng)皿底部貼壁,在鋪板前,可先將孔板包被一層薄薄的凝膠。具體方法是將凝膠和培養(yǎng)液按照 1:1 的體積比配置,鋪在孔板底部,待其凝固之后,再鋪凝膠細(xì)胞混合液。

細(xì)胞收集與再培養(yǎng)



  1. 回收凝膠中的細(xì)胞:棄掉培養(yǎng)液,并用裂解液沖洗培養(yǎng)孔板。加入凝膠液 5 倍體積的裂解液,輕輕吹打數(shù)次,在室溫下裂解約 10 分鐘,使凝膠wan全變成液體狀態(tài)。將混合液收集到離心管中,用 PBS 沖洗孔板,并將沖洗液也收集至上述離心管中。然后,以 1500 rpm      的轉(zhuǎn)速離心 3 分鐘,即可收集到細(xì)胞。如果細(xì)胞在凝膠內(nèi)是成團(tuán)生長(zhǎng)的,可以在裂解時(shí)適當(dāng)加大裂解液體積,并延長(zhǎng)裂解時(shí)間,以得到分散的單個(gè)細(xì)胞。

問題集



  1. 3D 細(xì)胞培養(yǎng)后如何染色?
         
    答:3D 細(xì)胞培養(yǎng)后可以直接在膠中進(jìn)行染色,染色步驟與      2D 培養(yǎng)的細(xì)胞相同,不需要進(jìn)行特殊處理。

  2. 3D 細(xì)胞培養(yǎng)后怎么觀察?
         
    答:3D 細(xì)胞培養(yǎng)后可以使用 Confocal 或者熒光倒置顯微鏡進(jìn)行觀察,光學(xué)顯微鏡也可以觀察,但是由于凝膠是立體結(jié)構(gòu),可能光學(xué)顯微鏡觀察的效果不會(huì)太理想。

  3. 你們的 3D 細(xì)胞培養(yǎng)凝膠能進(jìn)行培養(yǎng)嗎?
         
    答:可以。

  4. 你們的 3D 細(xì)胞培養(yǎng)凝膠使用時(shí)需要使用配套的專用耗材或者儀器嗎?
         
    答:不需要使用專用耗材和儀器。采用本試劑盒進(jìn)行 3D 細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)所用的耗材和儀器同 2D 培養(yǎng)。

  5. 你們的 3D 細(xì)胞培養(yǎng)凝膠試劑盒可以用于細(xì)胞共培養(yǎng)嗎?
         
    答:可以進(jìn)行細(xì)胞共培養(yǎng)。

  6. 你們的 3D 培養(yǎng)凝膠試劑盒是不是只能培養(yǎng)特定的一些細(xì)胞?
         
    答:本試劑盒對(duì)細(xì)胞沒有選擇性,對(duì)大多數(shù)細(xì)胞都是適用的。

  7. 你們的 3D 培養(yǎng)凝膠試劑盒和 Matrigel 基質(zhì)膠有何不同?
         
    答:Matrigel 基質(zhì)膠主要是由層粘連蛋白、型膠原、巢蛋白、硫酸肝素糖蛋白等組成,是從腫瘤中提取出來的,成分復(fù)雜。本試劑盒凝膠主要是由多肽和多糖構(gòu)成,為全人工合成的,無動(dòng)物源性。適用 Matrigel 基質(zhì)膠進(jìn)行 3D 培養(yǎng),其后期染色非常困難,細(xì)胞也無法回收。使用本試劑盒進(jìn)行 3D 培養(yǎng)后的細(xì)胞可以輕松染色,并可以在保持細(xì)胞活性的情況下回收細(xì)胞,是您      3D 培養(yǎng)的理想選擇。

  8. 你們的 3D 培養(yǎng)凝膠和軟瓊脂一樣嗎?
         
    答:我們的 3D 培養(yǎng)凝膠是人工合成的,其性能大大優(yōu)于軟瓊脂。

  9. 凝膠和細(xì)胞懸液混合這一步,是否有順序要求?
         
    答:有。必須嚴(yán)格按照說明書,先吸取凝膠到容器中,再往凝膠中加入細(xì)胞懸液,混勻。順序不可顛倒。否則不利于形成穩(wěn)定的凝膠結(jié)構(gòu)。

  10. 使用中如何吸取凝膠?
         
    答:先將槍頭jian端剪掉,用 PBS 潤(rùn)洗,然后再吸取凝膠。慢慢松開移液槍的按鈕,按鈕彈回原位之后,讓槍頭在凝膠液面以下稍多停留一會(huì)兒,再提槍,轉(zhuǎn)移凝膠到其他容器中。

  11. 吸取凝膠與混勻凝膠過程中,產(chǎn)生的氣泡可否消除?
         
    答:吸取與混勻凝膠過程中產(chǎn)生的氣泡不能消除,會(huì)影響后續(xù)實(shí)驗(yàn),所以,應(yīng)盡量避免氣泡產(chǎn)生。

  12. 怎樣達(dá)到更好的鋪板效果?
         
    答:鋪板前,采用分區(qū)域逐滴滴加的方式,把每一滴凝膠按一定排布次序滴在孔(或皿)的不同區(qū)域,滴好之后,用槍頭在凝膠表面輕輕引流,可獲得較為均勻的鋪板結(jié)果。鋪板后將培養(yǎng)板靜置孵育 5-30min,期間不要晃動(dòng)培養(yǎng)板。

  13. 何時(shí)shou次添加培養(yǎng)液?
         
    答:37℃恒溫培養(yǎng)箱中孵育 5-30min 形成穩(wěn)定凝膠結(jié)構(gòu)后即需要添加培養(yǎng)液。將培養(yǎng)液貼壁緩慢加入孔板中。

  14. 培養(yǎng)過程中需要如何換液?
         
    答:換液時(shí)注意先將負(fù)壓泵壓力調(diào)低。最好在培養(yǎng) 48 小時(shí)之后再進(jìn)行shou次換液。換液時(shí),棄掉 2/3 左右的舊液即可,留少量舊液以避免吸走凝膠;對(duì)于生長(zhǎng)快的細(xì)胞,24h 時(shí)可以換掉一半培養(yǎng)液。shou次換液時(shí)一定要緊貼培養(yǎng)孔壁,小心緩慢吸取舊液,避免吸掉剛貼附好的細(xì)胞。添加新液一定要貼壁、緩慢加入,以避免沖壞凝膠。此后可根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)速度,視培養(yǎng)液的消耗情況來換液。

 


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