貨號：AZ00003

儲運條件

-20℃

產(chǎn)品組成

產(chǎn)品簡介

All-in-One RT SuperMix for qPCR(with dsDNase) 是一款便捷、減少污染的高質(zhì)量一鏈cDNA 合成試劑盒，包含M-MLV GIIIReverse Transcriptase 及其反應(yīng)Buffer、RNA 酶抑制劑、dNTPs,Oligo(dT)20VN 和隨機引物等一鏈cDNA 合成所需的所有組分，僅需加入RNA 模板和水即可開始反應(yīng)。All-in-One RT SuperMix for qPCR(withdsDNase) 作為升后的一鏈cDNA 合成試劑盒，15 分鐘內(nèi)長可獲得12 kb cDNA，產(chǎn)物可用于qPCR、普通PCR 等實驗。從組織或細(xì)胞中提取的RNA 往往殘留基因組DNA 污染，如果反轉(zhuǎn)錄不做去除處理，下游進(jìn)行qPCR 反應(yīng)時基因組DNA 與cDNA會同時進(jìn)行擴增，尤其是引物設(shè)計在同一外顯子上時，影響定量準(zhǔn)確性。本試劑盒所采用的dsDNase 能夠特異性消化雙鏈DNA 或DNARNA雜合雙鏈中的DNA，并且具有熱敏感性，在逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)溫度下即可快速不可逆地失活。與傳統(tǒng)使DNase I 去除基因組DNA 污染的方法相比，dsDNase 無需額外加入EDTA 進(jìn)行失活，不僅節(jié)省實驗時間，而且降低了對逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)的抑制。可依據(jù)基因組DNA 污染嚴(yán)重程度，選擇去基因組DNA 污染與反轉(zhuǎn)錄分開進(jìn)行，或者去基因組DNA 污染與反轉(zhuǎn)錄一步進(jìn)行的操作方法。

使用方法

針對基因組DNA 含量低的RNA 樣品（推薦方案）

① 于冰上配制如下反應(yīng)體系：

a. 推薦使用試劑盒提取的高質(zhì)量RNA 作為模板。

② 輕柔吸打混勻，瞬離；

③ 37℃溫育2 min，以去除基因組DNA 污染；

④ 55℃溫育15 min；

⑤ 反應(yīng)結(jié)束后，85℃溫育2 min 以終止反應(yīng)；

⑥ 迅速將獲得的cDNA 置于冰上，用于后續(xù)實驗；或立即保存于-20℃。

針對基因組DNA 含量高RNA 樣品

1. 基因組DNA 污染去除

① 于冰上配制如下反應(yīng)體系：

a. 推薦采用試劑盒提取的RNA 作為模板。

② 輕柔吸打混勻，瞬離；

③ 37℃溫育2 min，以去除基因組DNA 污染；

注：若RNA 中基因組DNA 污染嚴(yán)重，可適當(dāng)延長37℃溫育時間至5 min。

④ 65℃溫育2 min，使dsDNase 失活，然后置于冰上。

2. diyi鏈cDNA 合成

① 于冰上配制如下反應(yīng)體系：

② 輕柔吸打混勻，瞬離；

③ 50℃溫育15 min；

注：若目標(biāo)RNA 不含Poly(A) 結(jié)構(gòu)，可預(yù)先25℃溫育10 min。

④ 反應(yīng)結(jié)束后，85℃溫育2 min，以終止反應(yīng)；

⑤ 將獲得的cDNA 溶液置于冰上，用于后續(xù)實驗。

注：cDNA 溶液置于-20℃儲存，建議不超過1 周；置于-80℃可儲存。

注意事項

預(yù)混液中已經(jīng)包含Oligo(dT)20VN 和隨機引物，不僅適用于包含Poly(A) 結(jié)構(gòu)的真核生物mRNA，也適用于不含Poly(A) 結(jié)構(gòu)的原核生物RNA、真核生物rRNA 和tRNA 等模板，但不適用于miRNA 等小RNA 模板。

美國Azaood公司成立于2004年，是一家開發(fā)和生產(chǎn)用于生命科學(xué)研究、診斷和生物技術(shù)應(yīng)用的高質(zhì)量純化酶、蛋白質(zhì)、核酸和細(xì)胞分離試劑盒、胎牛血清的行業(yè)導(dǎo)者；Azood公司是通過了ISO9001認(rèn)證的主要制造商，可以滿足從研究到大規(guī)模批量生物加工和OEM應(yīng)用與要求的公司。