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上海徠同生物科技有限公司

B-P-00002-2在3D細胞球體培養試驗中的步驟

時間:2022-2-9閱讀:154
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Catalog No. B-P-00002-2、B-P-00002-4、B-P-00002-10

Specification 2ml-kit、4ml-kit 、10ml-kit

Storage 4℃保存、 保存兩年

3D細胞球體培養試驗步驟:

A、試劑制備

1、A基質膠:將A基質膠溶于37℃水浴槽回溫10分鐘, 確認*融解.

2、C緩沖溶液(1X)制備:使用前將10X C緩沖溶液用冰的無細胞培養液(例如: 無血清DMEM、opt-MEM) 制備成 1X C 緩沖溶液。(不要用 PBS 稀釋 C 緩沖液) .

3、D 緩沖溶液(1X)制備: 使用前用冷的 1x PBS 稀釋 10X D 緩沖溶液至 1X D 緩沖溶液.

B、Biozellen®3D細胞培養基質膠的制備

全部步驟需要在無菌環境內操作,操作步驟如下:

1、將24孔培養板放置于冰上預冷半小時。

2、細胞計數后取 2×105~2×107 細胞與 0.5 毫升 37℃ 細胞培養基均勻混合,并與0.5毫升37℃ A膠按照 1:1 等比例均勻混合,最終細胞密度1*105~1*107cells/mL。

:請選擇適當的培養溶液與條件進行試驗。

3、取 20-40 微升步驟 2的混合液滴于 步驟 1 預冷的培養板上,膠體將于 5 分鐘內成膠。 注: 測試膠體是否成膠,可用微量吸管尖溫和的觸碰膠體表面進行確認。

4、待膠體成膠后,添加1毫升冰的1X C緩沖溶液,并蓋過步驟3 的膠溶液,固定 15 分鐘。

5、待15分鐘固定后,小心的吸取 C 緩沖溶液并置換為適合此細胞生長之培養基溶液。

6、將含有細胞的膠于37°C 二氧化碳培養箱內進行7~14天的培養,并觀察細胞球體的形成,按正常培養基更換頻率進行更換操作。

C、溶膠與收集細胞球體準備程序

1、小心的將培養基吸取移除,并用1X PBS進行清洗。

2、小心的將 1X PBS 吸取移除,并添加 1 毫升冰的D緩沖溶液,蓋過膠滴于室溫反應 5分鐘。

3、溫和的用1毫升移液管吸取,直到膠滴*溶解。

4、將含有細胞球體的溶液吸入1.5 毫升離心管,用1000 rpm的轉速離心10分鐘,移除上清液體并收集細胞球體做分析。

D、收集單顆細胞準備程序

在分離單細胞前,先按上述溶膠與收集細胞球體準備程序進行操作

1、添加trypsin-EDTA并與收集的細胞球體于37°C混合反應。

2、用1毫升移液管混合,直到細胞體*分解。

3、待細胞球體*分解,加入3倍體積的1X PBS,并用1000轉的轉速進行離心10分鐘,并移除上清液體收集沉淀的單細胞做分析。


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