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上海徠同生物科技有限公司

EZ細(xì)胞及動(dòng)物組織RNA直擴(kuò)RT-PCR試劑盒(一步法)

時(shí)間:2021-12-28閱讀:384
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EZ細(xì)胞及動(dòng)物組織RNA直擴(kuò)RT-PCR試劑盒(一步法) 不需提取細(xì)胞RNA,經(jīng)過30分鐘簡單處理后,直接進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增。可用于細(xì)胞基因的克隆、基因表達(dá)定量、RNA病毒基因的擴(kuò)增、RNA病毒PCR診斷、RNA病毒Real-time PCR診斷等。

產(chǎn)品資料

產(chǎn)品名稱:EZ細(xì)胞及動(dòng)物組織RNA直擴(kuò)RT-PCR試劑盒(一步法)

英文名稱:EZ Cell and Tissue RNA Direct PCR Kit(One Step)

產(chǎn)品規(guī)格:30T/100T

試劑盒應(yīng)用:細(xì)胞組織或細(xì)胞基因的擴(kuò)增與克隆、RNA病毒基因的擴(kuò)增、RNA病毒PCR診斷、RNA病毒Real-time PCR.。

試劑盒組成:RNA-EZ-1、RNA-EZ-2、RNA-EZ-3、RNA-EZ-4、RT-Enzyme、2*RT-Buffer、ddH2O

保存條件:-20oC保存。使用將RNA-EZ-1、RNA-EZ-4在室溫或37oC充分溶解。RNA-EZ-3、RNA-EZ-4和RT-Enzyme使用時(shí)需置于冰上。

使用方法:

細(xì)胞中RNA的擴(kuò)增

(1)將6ul RNA-EZ-1與3ul RNA-EZ-2充分融合。

(2)取20ul細(xì)胞懸液(10^5-10^6cells/ml),加入上述混合液,混勻。

(3)置于37oC靜置10分鐘。

(4)加入1ul RNA-EZ-3,混勻。

(5)置于37oC靜置15分鐘。

(6)置于98oC加熱5分鐘。

(7)加入60ul的RNA-EZ-4,混勻。

(8)取2ul(7)中處理液進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增。

組織塊中RNA的擴(kuò)增

(1)用 H2O 將 RNA-EZ-1 稀釋 5 倍,每 25 μL 的 RNA-EZ-1 稀釋液中加入 3 μL 的 RNA-EZ-2,混合均勻。同時(shí)處理多個(gè)組織塊時(shí),可以按照以上比例配制預(yù)混液并分裝到每個(gè)離心管 26 µL。

(2)切取半顆米粒大小的組織塊(< 3 mm3),*浸入上述混合液中。

(3)置于 37oC 靜置 10 分鐘。

(4)加入 1µL RNA-EZ-3,混勻。

(5)置于 37oC 靜置 15 分鐘。

(6)置于 98oC 加熱 5 分鐘。

(7)加入 60 μL RNA-EZ-4,混勻。

(8)取 2 μL(7)中處理液進(jìn)行 RT-PCR 擴(kuò)增。

Real-Time PCR

取上述細(xì)胞或組織處理液,加入特異性引物和 TaqMan 探針,可進(jìn)行特異性靶標(biāo) RNA 的絕對定

量檢測。如需進(jìn)行 SYBR Green Real-time PCR,請選擇 EZ021-01/-02(EZ® Cell and Tissue RNA Direct

PCR Kit(One Step))。

注意事項(xiàng)

(1)取樣的細(xì)胞量應(yīng)當(dāng)適中,濃度不宜過高或過低,處理后溶液應(yīng)當(dāng)以透明為宜。

(2) 樣品處理過程中應(yīng)當(dāng)防止交叉污染,推薦設(shè)置陰性對照參與處理過程,以檢測環(huán)境的污染。

(3)用本產(chǎn)品擴(kuò)增的 RNA 不宜太長,1000bp 及以內(nèi)的片段佳,期研究中可擴(kuò)增長達(dá) 1800bp的片段,擴(kuò)增片段越長效率越低。擴(kuò)增的成功率也與 RNA 的豐度、二結(jié)構(gòu)以及引物等有關(guān)。

(4)本產(chǎn)品同樣適用于相應(yīng)的細(xì)胞或組織中 RNA 病毒的 PCR、Real-Time PCR 診斷。

(5)2×RT-Buffer 中加入了染料和相應(yīng)試劑,可直接進(jìn)行電泳,無需另加 Loading buffer。

(6)處理 96 孔板中的細(xì)胞時(shí),可按照 ddH2O:RNA-EZ-1:RNA-EZ-2=20:5:3 的比例配制預(yù)混液,使用多道移液器直接加入 96 孔板經(jīng) DPBS 洗滌的細(xì)胞中,實(shí)現(xiàn)高通量操作。

(7)2×RT-Buffer 中的染料不影響 TaqMan 探針的效果。

某皰疹病毒的Taqman探針法定量檢測。將病毒進(jìn)行連續(xù)10倍稀釋,用EZ010試劑盒處理后,加入特異性Taqman探針,進(jìn)行qPCR擴(kuò)增,檢測曲線呈現(xiàn)明顯的梯度關(guān)系,樣品間重復(fù)性良好,Ct值線性模擬R2=0.9978

某皰疹病毒的Taqman探針法定量檢測。將病毒進(jìn)行連續(xù)10倍稀釋,用EZ010試劑盒處理后,加入特異性Taqman探針,進(jìn)行qPCR擴(kuò)增,檢測曲線呈現(xiàn)明顯的梯度關(guān)系,樣品間重復(fù)性良好,Ct值線性模擬R2=0.9978


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