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觸酶試驗(yàn)酶液制備的實(shí)驗(yàn)步驟
觸酶試驗(yàn)是關(guān)于觸酶的一個(gè)實(shí)驗(yàn)做法。大多需氧和兼性厭氧菌均產(chǎn)生過(guò)氧化氫酶，但鏈球菌屬陰性，故常用此試驗(yàn)來(lái)鑒定。分枝桿菌的鑒別則用耐熱觸酶試驗(yàn)，結(jié)核分枝桿菌為陰性，戈氏分枝桿菌和地分枝桿菌為陽(yáng)性。
觸酶試驗(yàn)酶液的制備：
1.稱取葉片 0.25g ，加入5倍量的(M/V)pH7.0 的PBS冰浴研磨 15000r/min
離心15min取部分上清液經(jīng)適當(dāng)稀釋后用于酶活性測(cè)定。
2.CAT活性的測(cè)定
在3ml的反應(yīng)體系中，包括0.3% H2021ml, H20 1.95ml, 最后加入0.05ml酶液
啟動(dòng)反應(yīng)，測(cè)定波長(zhǎng)240nm處的OD降低速度。將每分鐘OD減少0.01定義為1個(gè)活力單位。
3.POD活性的測(cè)定
在3ml的反應(yīng)體系中，包括0.3% H2021ml, .0.2% 愈創(chuàng)木酚0.95ml,pH7.0的PBS 1ml，最后加入0.05ml酶液?jiǎn)?dòng)反應(yīng)，記錄470nm處OD增加速度。將每分鐘OD增加0.01定義為1個(gè)活力單位。
4. 用考馬斯亮藍(lán) G-250法測(cè)定蛋白含量。