產(chǎn)品特點：

本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量PCR產(chǎn)品。

原理是由一對引物介導(dǎo)，能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增，經(jīng)過n個熱循環(huán)擴增，擴增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0＜E＜1，擴增效率＝倍，使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。

運輸：低溫

保存：負20度

有效期：一年

貨期：2-3周

注意事項：

1.基礎(chǔ)程序；

2.擴增溫度和延伸溫度；

3.反應(yīng)時間；

4.循環(huán)次數(shù)；

5.PCR反應(yīng)液的配制；

6.PCR技術(shù)的基本原理；

7.PCR的反應(yīng)動力學(xué)；

8.PCR擴增產(chǎn)物；

9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

浮萍染料法PCR鑒定試劑盒使用方法：

一、稀釋標準曲線樣品（以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例）。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。

1. 標記6個離心管，分別為7，6，5，4，3，2。

2. 用帶芯槍頭分別加入45μL熒光PCR模板稀釋液，用帶芯槍頭，下同）。

3. 在7號管中加入5μL陽性對照（濃度為1×10E8拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。

4. 換槍頭，在6號管中加入5μL 1×10E7拷貝/μL的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。

5. 換槍頭，在5號管中加入5μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。

6. 重復(fù)上面的操作直到得到6個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。

二、樣品DNA的制備

7. 用自選方法純化樣品的DNA，本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。

8. 如果有N個樣品，則需要進行N+2個樣品提取，多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。

三、設(shè)置qPCR反應(yīng)（20μL體系，在樣品制備室進行）

9. 如果做定量分析并且只做1次重復(fù)，則標記N+9個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照（用水做模板），6個用于標準曲線。如果做定性分析，并且只做1次重復(fù)，則標記N+4個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照（用水做模板），1個用于PCR陽性對照。

注意事項：

①加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。

②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。

③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

④底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。

⑤洗滌酶標板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應(yīng)孔中吸水。

⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器 。

⑦實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。

⑧試劑應(yīng)按標簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標準品應(yīng)丟棄，不可保存。

⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。