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南京信帆生物技術有限公司
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堿性磷酸酶顯色試劑盒BCIP/NBT

時間:2022/7/14閱讀:1277
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堿性磷酸酶顯色試劑盒BCIP/NBT

 

 

產品描述:

本試劑盒應用于胚胎干細胞(ES)和誘導多功能干細胞(iPS)的鑒定,以及免疫組化、免疫印跡等實驗中的堿性磷酸酶顯色。試劑盒內的5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸鹽(BCIP)/硝基四氮唑藍(NBT)是堿性磷酸酶(AP)的常用底物之一,BCIP在AP的催化下會被水解生成強反應性產物,后者與硝基四氮唑藍(NBT)反應生成不溶性產物,使之呈現深藍色至藍紫色。

 

操作指南:

1. AP顯色工作液的配制:

取20μl 150×NBT溶液加入到3ml堿性磷酸酶顯色反應緩沖液,充分混合均勻,再加入30μl 100×BCIP溶液,配置成工作液,如需改變工作液體積,可按相同比例適量配制。1h內使用。

2.  顯色步驟:

a)  檢測細胞的內源性堿性磷酸酶:吸出培養基,PBS潤洗3次,加入4%多聚甲醛固定1-2min。吸出固定液,使用TBST清洗三次,加入顯色工作液,室溫避光孵育5-30分鐘,顯色至預期深淺后,用PBS潤洗1次,然后保存于PBS溶液中,顯微鏡下觀察結果。

b)  檢測組織切片或膜上結合的堿性磷酸酶抗體:使用洗滌液洗滌完后,加入適量工作液,保證*覆蓋樣品表面,室溫避光孵育5-30分鐘,顯色至預期深淺后,去除工作液,用蒸餾水清洗1-2次終止顯色反應。

 

注意事項:

1. BCIP和NBT對人體有刺激性,請注意適當防護。

2. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。


保存條件:

2-8℃保存,100×BCIP溶液和150×NBT溶液需避光保存,一年有效。

 

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