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上海嘉鵬
主營產(chǎn)品： 超微量分光光度計,核酸蛋白檢測儀,超微量紫外分光光度計,nano光度計,超微量核酸蛋白檢測儀 |
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2016-3-15 閱讀(5363)
在PCR儀上完成一個PCR反應(yīng)所需要的時間決定于以下幾個因素：
1、模塊升溫和降溫時間
2、模塊與PCR管內(nèi)溫度平衡時間
3、延伸時間
4、循環(huán)次數(shù)
下面就以上幾點做一點分析，以便大家了解快速PCR技術(shù)與快速PCR儀的區(qū)別。
1、模塊升溫和降溫度時間
PCR儀一般會標明升溫速度和降溫速度，但標的大多是zui大變溫速度，也就是說是瞬間達到的速度。而與實驗相關(guān)的平均升降溫速度只有極少量廠家標明。以平均2度和4度（能做到平均升降溫4度的儀器極少）來計算，從95度降到55度，分別是20秒和10秒，每一個循環(huán)差20秒鐘。以一般35個循環(huán)來計算，影響實驗時間700秒，也就是不到12分鐘。實際還要考慮過沖問題，影響時間還會少些。
2、模塊與PCR管內(nèi)溫度平衡時間
模塊溫度達到后，PCR管內(nèi)的溫度遠沒有達到（塑料和水的導(dǎo)熱系數(shù)比鋁塊差300倍以上），需要時間來使二者達到平衡。一般有四種辦法來減少這一時間，一是讓模塊溫度過沖，在管內(nèi)溫度快達到時降到目標溫度，但太高的過沖可能造成實際溫度過沖，影響PCR反應(yīng)結(jié)果；二是減少PCR反應(yīng)液的體積，但體積變小時PCR反應(yīng)的可靠性會降低；三是降低PCR管的厚度，但太薄時強度不夠；四是增加PCR管與模塊貼附程度。
3、延伸時間
延伸時間與PCR產(chǎn)物的長度和DNA聚合酶的合成速度有關(guān)。如果PCR產(chǎn)物長度少于100bp時，可能考慮將延伸時間變?yōu)?（即兩步法）；采用高速的DNA聚合酶也是常用的方法，但并不是所有PCR實驗都可以用高速的DNA聚合酶。
4、循環(huán)次數(shù)
循環(huán)次數(shù)與模板量及檢測要求相關(guān)。
所謂快速PCR技術(shù)是將快速PCR儀與超薄管（或特殊貼附技術(shù)）以及高速DNA聚合酶等技術(shù)整合在一起，可達到較短時間完成PCR反應(yīng)。而一些廠家在向用戶推銷PCR儀時，不去說明快速PCR技術(shù)，只強調(diào)PCR儀速度快（大都用zui大升降溫速度來HuYou用戶）。好像買了快速PCR儀后，原來1個半小時的擴增時間變會縮短成半小時似的。而用戶采購了快速PCR儀后才發(fā)現(xiàn)并不那么回事。有不少用戶采用快速模式根本就做不出好的實驗結(jié)果。特別是進行多重PCR擴增的用戶，如*系統(tǒng)用于身份鑒定的試劑。
快速PCR技術(shù)與快速PCR儀是兩回事。快速PCR儀zui多只能縮短PCR反應(yīng)時間10分鐘左右，要實現(xiàn)真正的快速PCR反應(yīng)，還需要其他一些努力。大多數(shù)用戶根本就不需要快速PCR技術(shù)。
上海嘉鵬科技有限公司專業(yè)生產(chǎn)：紫外分析儀、三用紫外分析儀、暗箱式紫外分析儀、暗箱三用紫外分析儀、暗箱紫外分析儀、手提式紫外分析儀、三用紫外分析儀暗箱式、紫外檢測儀、部分收集器、恒流泵、蠕動泵、凝膠成像系統(tǒng)、凝膠成像分析系統(tǒng)、化學(xué)發(fā)光成像分析系統(tǒng)、光化學(xué)反應(yīng)儀、旋渦混合器、漩渦混合器、玻璃層析柱、梯度混合器、梯度混合儀、核酸蛋白檢測儀、玻璃層析柱、熒光增白劑測定儀、餾分收集器、切膠儀、藍光切膠儀、層析系統(tǒng)等產(chǎn)品。咨詢。
