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青島捷世康生物科技有限公司
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谷胺酰胺合成酶試劑盒說明書

時間:2016/5/3閱讀:1733
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谷胺酰胺合成酶Glutamine synthetase,GS試劑盒說明書

分光光度法 50 管/24 樣

測定意義

    GSEC 6.3.1.2主要存在于植物中是生物體內氨同化的關鍵酶之一,催化銨離子和谷氨 酸合成谷氨酰胺,不僅可以防止過多的銨離子對生物有毒性,而且谷氨酰胺也是氨的主要儲 存和運輸形式。

測定原理

    GS  ATP  Mg2+存在下催化銨離子和谷氨酸合成谷氨酰胺;谷氨酰胺進一步轉化為γ─ 谷氨?;惲u肟酸在酸性條件下與鐵形成紅色的絡合物;該絡合物在 540nm 處有zui大吸 收峰,可用分光光度計測定。

所需的儀器和用品

可見分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸 餾水。

試劑的組成和配制

提取液30mL×1 瓶,4℃保存。 試劑一10mL×1 瓶,-20℃存。

試劑二10mL×1 瓶,-20℃存。

試劑三粉劑×2 瓶,-20℃保存。用時每瓶加入 5mL 蒸餾水充分溶解備用用不完的試劑仍 -20℃保存。

試劑四10mL×1 瓶4℃保存。

樣本測定的準備

按照組織質量g):提取液體積(mL)15~10 的比例建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

測定步驟

1、分光光度計預熱 30min 以上,調節波長至 540nm,蒸餾水零。 2、在 EP 管中加入下列試劑

試劑名稱μL

測定管

對照管

 

 

 

試劑一

320

 

 

 

 

試劑二

 

320

 

 

 

試劑三

140

140

 

 

 

樣本

140

140

 

 

 

混勻37哺乳動物25其他物種準確水浴 30min

 

 

 

試劑四

200

200

 

 

 

 

混勻靜置 10min 后5000g常溫離心 10min,取上清液測定 540nm 處的吸光值 A。△A=A 測定管-A 對照管。每個測定管需設一個對照管。

GS 活力單位的計算

1按樣本蛋白濃度計算

單位的定義mg 組織蛋白在每 mL 反應體系中每 min 使 540nm 下吸光值變化 0.01 定義 為一個酶活力單位。

GSU/mg prot)=ΔA×V 反總÷Cpr×V ÷0.01÷T =19×ΔA÷Cpr

  1. 按樣本鮮重計算

單位的定義g 組織在每 mL 反應體系中每 min 使 540nm 下吸光值變化 0.01 定義為一個 酶活力單位。GSU/g 鮮重)=ΔA×V 反總÷(W× V ÷V 樣總)÷0.01÷T =19×ΔA÷WV 反總反應體系總體積,0.8mL; V 加入樣本體積,0.14mLV 樣總加入提取液 體積1 mL;T反應時間30 min;Cpr樣本蛋白質濃度mg/mL;W樣本質量,g.

    來源于青島捷世康:www.jisskang。。com

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