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青島捷世康生物科技有限公司
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葡萄糖氧化酶試劑盒說明書

時間:2016/10/19閱讀:2069
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葡萄糖氧化酶(glucose oxidaseGOD)試劑盒說明書

 

分光光度法 50 管/48 樣

測定意義

GODEC 1.1.3.4)廣泛存在于動物、和植物中,催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸,并產生 H2O2,是生物體中產生活性氧的代謝途徑之一。

測定原理

GOD 催化產生 H2O2,過氧化物酶在有氧存在時催化 H2O2 分解產生的氧又將鄰聯茴香胺氧化生成有色物質,顏色深淺與葡萄糖氧化酶活性成線性關系。

試驗中所需的儀器和設備

可見分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研缽、冰、蒸餾水

試劑的組成和配制

提取液:液體 60mL×1 瓶,4℃保存;試劑一:液體 40 mL×1 瓶,4℃保存;試劑二:液體 8 mL×1 瓶,4℃保存;試劑三:液體 2 mL×1 支,4℃保存;

樣品測定的準備

組織處理:按照組織質量(g):提取液體積(mL)15~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

血清(漿):直接檢測。

測定步驟

1、分光光度計預熱 30min 以上,調節波長至 500nm,蒸餾水調零。

2GOD 檢測工作液的配制:用時將試劑二和試劑三轉移至試劑一中,充分混勻,待用。3、測定前將 GOD 檢測工作液在 37℃(哺乳動物)或 25℃(其它物種)水浴 10min 以上。4、在 1mL 玻璃比色皿中加入 40μL 樣本和 960μL 工作液,立即混勻并計時,記錄 500nm  20s 吸光值 A1  1min20s 后的吸光值 A2。計算ΔAA2-A1

GOD 活力單位的計算

1、血清(漿)GOD 活力的計算

單位定義mL 血清(漿)每分鐘催化產生 1nmol 氧化型鄰聯茴香胺為一個酶活力單位。

GODU/mL=[ΔA×V 反總÷ε×d×109]÷V ÷T=3333×ΔA

2、動物組織 GOD 活力的計算(1)按蛋白濃度計算

單位定義mg 組織蛋白每分鐘催化產生 1nmol 氧化型鄰聯茴香胺為一個酶活力單位。

GODU/mg prot=[ΔA×V 反總÷ε×d×109]÷(V ×Cpr)÷T=3333×ΔA÷Cpr

2)按樣本鮮重計算

單位定義:每 g 組織每分鐘催化產生 1nmol 氧化型鄰聯茴香胺為一個酶活力單位。

GODU/ g 鮮重)=[ΔA×V 反總÷ε×d×109W ×V ÷V 樣總)÷T=3333×ΔA÷W V 反總:反應體系總體積,1×10-3 Lε:氧化型鄰聯茴香胺摩爾消光系數,7.5×103 L / mol /cm

d:比色皿光徑,1cmV 樣:加入樣本體積,0.04 mLV 樣總:加入提取液體積,1 mLT:反應時間,1 min Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mLW:樣本質量,g

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