倒置熒光顯微鏡是一種光學顯微鏡，其設計特點是物鏡位于樣品的下方，而光源和觀察系統則位于樣品的上方。這種設計使得倒置熒光顯微鏡特別適合于觀察生長在培養皿或細胞培養瓶中的活細胞或組織。由于樣品容器可以放置在物鏡之上，因此可以輕松地添加培養基或其他液體，而不會干擾顯微鏡的光學路徑。
倒置熒光顯微鏡的工作原理
倒置熒光顯微鏡利用熒光染料或熒光蛋白標記樣品中的特定結構或分子。當激發光照射到標記的樣品上時，這些熒光分子會吸收光能并發射出更高波長的光，從而產生熒光信號。通過選擇合適的激發光和發射濾光片，可以觀察到樣品中的特定熒光標記，實現對細胞結構或分子活動的高對比度和高靈敏度成像。
主要組件
1. 物鏡：位于樣品下方，用于放大樣品圖像。
2. 光源：通常為高強度的鹵素燈或LED燈，提供激發光。
3. 激發濾光片：篩選特定波長的激發光，以激發熒光染料。
4. 發射濾光片：阻擋激發光，只允許熒光信號通過。
5. 分光鏡：將激發光導向樣品，并將熒光信號導向觀察系統。
6. 目鏡：進一步放大物鏡所成的中間像，供觀察者觀看。
應用領域
倒置熒光顯微鏡廣泛應用于細胞生物學、組織培養、微生物學、藥理學和遺傳學等領域。它能夠幫助研究人員觀察細胞的形態、細胞骨架、細胞分裂過程、蛋白質定位、基因表達以及細胞間的相互作用等。
優點
1. 適合活細胞觀察：由于樣品容器可以方便地放置和移除，倒置熒光顯微鏡非常適合長時間觀察活細胞。
2. 樣品更換簡便：更換樣品時無需移動物鏡，減少了對樣品和顯微鏡的損傷風險。
3. 多樣的樣品容器：適用于多種類型的培養容器，如培養皿、多孔板和細胞培養瓶。
4. 高對比度成像：熒光成像技術提供了高對比度的圖像，有助于觀察微小的細胞結構和分子活動。
挑戰
1. 熒光漂白：長時間的光照射可能導致熒光染料或熒光蛋白的漂白，影響成像質量。
2. 樣品污染風險：由于樣品容器開口向上，容易受到外界污染。
3. 光學限制：由于物鏡位于樣品下方，對樣品的厚度和透明度有一定要求。
倒置熒光顯微鏡是現代生物醫學研究中的工具，它通過提供高分辨率和高對比度的熒光圖像，極大地推動了細胞生物學和相關領域的研究進展。
