高效液相色譜儀常用檢測器--蒸發光散射檢測器

蒸發光散射檢測器（evaporative light—scattering detector，ELSD）是20世紀90年代出現的新型通用型質量檢測器，它適用于檢測揮發性低于流動相的組分，主要用于檢測糖類、高級脂肪酸、磷脂、維生素、氨基酸、甘油三酯及甾體等，并在沒有標準品和化合物結構參數未知的情況下檢測未知化合物。對各物質有幾乎相同的響應，但是其靈敏度比較低，尤其是有紫外吸收的組分。此外流動相必須是揮發性的，不能含有緩沖鹽等。它的通用檢測原理克服了常見于液相色譜傳統檢測方法的不足，已越來越多地應用于HPLC、超臨界色譜和逆流色譜中。不同于紫外和熒光檢測器，ELSD的響應不依賴于樣品的光學特性，任何揮發性低于流動相的樣品均能被檢測，不受其官能團的影響。靈敏度比示差折光檢測器高，對溫度變化不敏感，基線穩定，適合與梯度洗脫液相色譜聯用。

（1）液相色譜ELSD檢測原理

ELSD運行有三個過程：第一是霧化過程，用惰性氣體或凈化空氣將色譜柱流出物霧化；第二是蒸發過程，在一個加熱管（漂移管）中將流動相揮發；第三是檢測過程，測定留下來的樣品顆粒的光散射。所有商品ELSD都由一種或兩種模式完成這三個過程。模式A的操作是全部柱流出物（氣溶膠）都進入直的漂移管，讓流動相在其中蒸發，模式B中是將氣溶膠通過一個彎管，在此管中大的顆粒沉積下來流入廢氣管，其余的小顆粒進入螺旋狀的漂移管，在上述兩種模式中，樣品顆粒均進入光管，使激光發生散射而得以檢測。

（2）液相色譜ELSD檢測的優點及缺點

優點：

①具有較好的通用性，任何揮發性低于流動相的樣品均能被檢測；

②在相同色譜條件下，物理性質相似的物質可給出一致的響應；

③能與梯度洗脫方式相容;

④靈敏度高于示差折光檢測器、紫外末端吸收檢測法。

⑤在ELSD上開發的實驗方法移植到質譜上則無需修改。

ELSD檢測的不足之處主要是：

①靈敏度不夠理想；

②流動相的選擇受限；

③某些樣品線性范圍較窄等。

（3）影響液相色譜ELSD檢測性能的基本因素

①操作模式選擇，選擇合適的操作模式可提高方法的靈敏度，操作模式的選擇取決于樣品的揮發性、流動相的組成及其流速。

②流動相組成及流速選擇，流動相的揮發性越好，方法的靈敏度越高。流動相的流速越低，相應的信號越強。

③漂移管溫度對基線水平和噪音的影響并無明顯規律性，溫度應為在流動相基本揮發基礎上，產生可接受噪音的溫度。

④載氣流速是影響檢測性能的一個很重要因素。載氣流速應是在可接受噪音的基礎上（例如0.5mV），產生最大檢測響應值時的流速。

（4）液相色譜ELSD檢測時的數據處理模式

ELSD檢測最常采用的數學模型是lgy=algx+b （y為響應值，x為進樣量或樣品濃度，a、b為回歸常數），也有采用二次曲線模型的（y=ax2+bx+c）。由于響應值（y）與進樣量（x）之間并非線性關系，故其數據處理不同于紫外檢測方法。ELSD測定已知物質的含量時，一般應用隨行標準曲線法而非外標法，因為校正線性方程的截距并不為零。新藥基準品的建立，除了對照品為另外一種含量已知、結構相似的物質外，數據處理方式同上相似。ELSD測定物質純度時，由于響應值與進樣量間并非線性關系，多通過繪制其中的一種或數種物質的隨行標準曲線來加以校正。多組分物質的分析，除了隨行校正曲線的線性范圍有所區別外，數據處理同上類似。盡管存在一些不足之處，但是ELSD作為一種新型的通用型質量檢測器，具有許多的優勢，例如它的通用性，響應因子的一致性以及與梯度洗脫相容等，將在無特征紫外吸收物質的分析方面發揮越來越重要的作用。