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NGS文庫構(gòu)建產(chǎn)品選擇指南YEASEN與NGS高通量測序是對傳統(tǒng)測序技術(shù)的革命性創(chuàng)新，大力推動了科學(xué)技術(shù)的發(fā)展。Yeasen長期以來一直對高通量測序技術(shù)保持高度關(guān)注。自2009年成立以來，公司致力于分子酶的創(chuàng)新開發(fā)，結(jié)合自身多年分子酶研發(fā)經(jīng)驗，集結(jié)了在基因組學(xué)和生物信息學(xué)等領(lǐng)域有豐富經(jīng)驗的科研人員組建了高通量測序研發(fā)團(tuán)隊，成功推出了高通量測序上游樣本文庫制備的完整產(chǎn)品線。不僅可以提供的建庫試劑盒，同時還可以根據(jù)客戶的需求定制開發(fā)測序相關(guān)產(chǎn)品。廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)檢測、科學(xué)研究等各個領(lǐng)域。公司注重產(chǎn)品品
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DNA建庫磁珠——你選對了嗎？背景介紹磁珠是高通量測序過程產(chǎn)品，通過磁顆粒活性基團(tuán)在一定條件下可與核酸結(jié)合和解離的原理，將樣本中目的片段分離?？蓪崿F(xiàn)對核酸樣本的高通量自動化操作，廣泛應(yīng)用于基因測序以及分子診斷領(lǐng)域。商業(yè)化磁珠產(chǎn)品體系一般包含：磁珠、聚乙二醇（PEG）、鹽離子等?；赟PRI(SolidPhaseReversibleImmobilization)技術(shù)，DNA在一定濃度的PEG存在條件下，NaCl或MgCl2促進(jìn)條件下，DNA分子構(gòu)象會發(fā)生急劇變化，會暴露出磷酸骨架上大量的帶負(fù)電荷的
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基因治療領(lǐng)域的*--mRNA疫苗據(jù)路透社3月15日報道：美國政府正試圖說服疫苗研發(fā)的德國公司CureVac搬遷到美國并壟斷其疫苗生產(chǎn)，而德國政府希望該公司能留在本國。那么，CureVac公司擁有什么重要的東西竟讓兩個國家政府直接出面進(jìn)行爭奪？答案就是——mRNA疫苗制備技術(shù)。什么是mRNA疫苗mRNA疫苗是將RNA在體外進(jìn)行相關(guān)的修飾后傳遞至機(jī)體細(xì)胞內(nèi)表達(dá)并產(chǎn)生蛋白抗原，從而導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生針對該抗原的免疫應(yīng)答，進(jìn)而擴(kuò)大機(jī)體的免疫能力[1,3]。圖1：直接注射mRNA疫苗效果示意圖[2]mRNA疫苗的
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測序數(shù)據(jù)不好？是不是建庫出了問題？！——從測序數(shù)據(jù)看文庫構(gòu)建高通量測序中的文庫構(gòu)建指的是在DNA兩端連接特定的接頭從而使其符合測序平臺要求的過程，在高通量測序過程中，文庫質(zhì)量直接影響終測序數(shù)據(jù)的質(zhì)量，打個比方，如果文庫上機(jī)測序的濃度很低，樣本在FlowCell上擴(kuò)增所形成的DNA樣本簇就會很少，測序數(shù)據(jù)量也將減少，這就可能導(dǎo)致測序失敗，所以我們說文庫的質(zhì)量控制和質(zhì)量評估也是NGS中的關(guān)鍵步驟。文庫如何質(zhì)控？評估文庫質(zhì)量的方法有哪些？文庫質(zhì)控：文庫在上機(jī)之前都有會進(jìn)行質(zhì)量檢測，質(zhì)量檢測合格的文庫才
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實驗室常用到的實驗：逆轉(zhuǎn)錄實驗實驗人員通過體外模擬病毒復(fù)制過程，以提取的RNA為模板，使用逆轉(zhuǎn)錄酶催化，合成出與RNA互補(bǔ)的cDNA鏈。終構(gòu)建cDNA文庫，并從中篩選所需的靶標(biāo)基因。BUT！小伙伴們做逆轉(zhuǎn)錄實驗時，1）有沒有深究過RNA逆轉(zhuǎn)錄出的cDNA能不能真實反映出基因表達(dá)信息？2）做實驗時，有沒有發(fā)生過內(nèi)參做的很好，目的基因做不出的情況？如果有發(fā)生上述情況，那么需要重新評估逆轉(zhuǎn)錄實驗結(jié)果的有效性。逆轉(zhuǎn)錄結(jié)果有效性的評定逆轉(zhuǎn)錄實驗結(jié)果有效性的評定重要的是盡可能反映樣本中原始RNA模板的信息，
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雙判定標(biāo)準(zhǔn)判定qPCR擴(kuò)增特異性，提升Ct值真實性
qPCR實驗易做，但數(shù)據(jù)分析并非想象中的那么容易！數(shù)據(jù)分析的好與壞，極大程度上依賴于qPCR原始結(jié)果的質(zhì)量。qPCR結(jié)果的評價指標(biāo)?溶解曲線，是qPCR結(jié)果判定的第—要素。它的作用是判定目的基因是否得到擴(kuò)增。理論上，當(dāng)反應(yīng)體系中僅是目標(biāo)基因的擴(kuò)增，才是有效擴(kuò)增。?標(biāo)準(zhǔn)曲線，是qPCR結(jié)果判定的金標(biāo)準(zhǔn)。（在溶解曲線判定為特異性擴(kuò)增后）它的作用是測定引物的擴(kuò)增效率及試劑的檢測上下限。根據(jù)文章發(fā)表對于qPCR數(shù)據(jù)的要求，擴(kuò)增效率應(yīng)在90-110%。?擴(kuò)增曲線，是直接生成qPCR定量的數(shù)據(jù)，即Ct值。從 -
qPCR進(jìn)階攻略—帶你玩轉(zhuǎn)儀器設(shè)置
熒光定量PCR實驗是分子實驗室常用的一項技術(shù)。持續(xù)關(guān)注小翊的應(yīng)該都掌握了高質(zhì)量cDNA的獲取方法，引物設(shè)計指南以及反應(yīng)體系的配制技巧（還未get的小伙伴戳文末鏈接），然而上機(jī)時，發(fā)現(xiàn)和別人的反應(yīng)條件不一致卻又不敢動儀器？本期小翊將帶你玩轉(zhuǎn)qPCR儀器的設(shè)置！目前市面上的qPCR儀器種類五花八門，但基本上儀器的設(shè)置都相對一致。我們以ABI7500為例進(jìn)行介紹。反應(yīng)板設(shè)置實驗?zāi)康倪x擇：我們將實驗命名為“Yeasen”，進(jìn)行“Quantitation：ΔΔCt”實驗。實驗方法選擇：如選用SYBRGre -
dsDNAHSAssayKitforQubit®——給我5min，還你一個準(zhǔn)確定量結(jié)果1產(chǎn)品概述dsDNAAssayKitforQubit®是Yeasen生物開發(fā)的專門用于Qubit®熒光儀或熒光酶標(biāo)儀的試劑盒，線性范圍0.2-100ng，即使在存在ssDNA、RNA和單體核苷酸的條件下，也可以選擇性的檢測dsDNA，且耐受較高濃度的蛋白質(zhì)、鹽類、洗滌劑等污染物。2產(chǎn)品優(yōu)勢1）操作簡便——5min之內(nèi)出結(jié)果2）高選擇性——對dsDNA具有高度選擇性，不定量RNA和ssDNA。圖dsDNAAssa
