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漲知識 | qPCR專場五：如何分析熒光定量數(shù)據(jù)？
漲知識|qPCR專場五：如何分析熒光定量數(shù)據(jù)？熒光定量PCR是實驗室中出鏡率非常高的一種檢測方法。該方法通過在PCR體系中添加熒光基團來記錄DNA產(chǎn)物的累積情況，從而達到對PCR過程進行實時監(jiān)控的目的，并且可以通過數(shù)據(jù)分析計算出起始模板量，這就是“熒光定量”中“定量”一詞的來源。熒光定量PCR實驗因為靈敏度高所以經(jīng)常是差之毫厘謬以千里，所以在實驗過程中，我們需要注意諸多細節(jié)，謹慎操作。小伙伴們看到這里就要著急了，我怎樣才能做好qPCR實驗，拿到實驗結果，發(fā)表高分文章，走上人生呢？熒光定量PCR可 -
蛋白酶抑制劑/磷酸酶抑制劑為何清除蛋白中的蛋白酶及磷酸酶？在平衡狀態(tài)下內(nèi)源性蛋白質(zhì)產(chǎn)生并降解，因此其細胞水平是穩(wěn)定的。當在體外從細胞和組織中提取蛋白質(zhì)時，與蛋白一起釋放出來的還有許多能夠降解提取物中的蛋白質(zhì)的內(nèi)源酶，例如磷酸酶和蛋白酶。此時由于蛋白質(zhì)產(chǎn)生被顯著抑制，降解繼續(xù)，因此這些酶可以快速降解提取物中的蛋白。為了防止蛋白純化過程中目的蛋白不受蛋白酶的破壞，需要加入蛋白酶抑制劑對其進行活性抑制。另外，細胞中蛋白的磷酸化和去磷酸化是信號轉(zhuǎn)導、細胞增殖、細胞分化和細胞凋亡等許多重要的生物學活動的調(diào)
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蛋白免疫印跡技術大揭秘！近距離防踩坑~蛋白免疫印跡技術是分子生物學中常用的三種印記技術之一，具有分析容量大、敏感度高、特異性強等優(yōu)點，是檢測蛋白質(zhì)特性、表達與分布的一種的方法，如組織抗原的定性定量檢測、多肽分子的質(zhì)量測定及病毒的抗體或抗原檢測等。被廣泛應用于蛋白質(zhì)相互作用、疾病診斷和藥物研發(fā)等領域。為助力解決蛋白免疫印跡技術中出現(xiàn)的問題，提高科研工作者的基礎技能水平，山東大學齊魯醫(yī)院（第一臨床學院）學生黨總支研究生第九黨支部聯(lián)合翌圣生物，于9月12日（本周二）舉辦“新學期，新征程——蛋白免疫印跡
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凝膠過濾層析(GelFiltrationChromatography)也稱為分子篩或體積排阻層析(SizeExclusionChromatography)，是根據(jù)分子大小和形狀的差異進行分離的一種簡單可靠的層析技術。凝膠過濾層析屬于非吸附類層析。分離原理凝膠過濾填料為三維立體網(wǎng)狀結構，由于凝膠網(wǎng)孔大小的限制，大分子將不能進入凝膠顆粒內(nèi)部（即被凝膠排阻在外），僅能在凝膠顆粒間隙移動，并隨緩沖液一起從柱底先行洗脫。小分子可以自由進入并擴散到凝膠顆粒內(nèi)部，小分子歷經(jīng)的路徑更長，將較晚從柱上洗脫。由于樣
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干貨│從原理到應用，帶你全方面了解T4 gene 32 protein
T4噬菌體基因32編碼蛋白(T4gene32protein，gp32)是一種單鏈DNA（ssDNA）結合蛋白，為T4噬菌體DNA復制和修復所必需。它被廣泛地用于穩(wěn)定和標記ssDNA區(qū)域，以便用電子顯微鏡觀察細胞內(nèi)DNA的結構、促進限制性內(nèi)切酶的消化反應、提高RT-PCR中反轉(zhuǎn)錄的效率、增強T4DNA聚合酶的活性和提高PCR的產(chǎn)量等。T4gene32protein的結構T4gene32protein由301個氨基酸組成，大小為34kDa，包含三個不同的結構域：核心結構域、N端結構域（NTD）和C端 -
分子克隆作為分子生物學的一項成熟技術，幾乎每個實驗室都或多或少的會涉及。在分子克隆實驗中，限制性內(nèi)切酶是克隆產(chǎn)品，但大家也常常因為限制性內(nèi)切酶的各種問題而感到煩擾。比如小翌常被問到的：1.限制性內(nèi)切酶種類這么多，不知道如何選擇；2.酶切不完或出現(xiàn)亂切、錯切的情況；3.酶切速度慢，需要1h甚至過夜酶；4.多酶切還需要選擇多款酶切緩沖液。……針對第1個問題，小翌會簡單介紹一下什么是限制性內(nèi)切酶，不同內(nèi)切酶的分類如何，讓您對限制性內(nèi)切酶有一個更全面的認識。針對第2~4個問題，翌圣FuniCut®系列快
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什么是病毒滴度呢？就像重組蛋白合成以后需要檢測純度一樣，病毒包裝后的效力如何，如何定量，也是必須要檢測的，專業(yè)術語稱為：病毒滴度的測定。病毒滴度是指單位體積液體中具有生物活性的病毒顆粒數(shù)，是衡量病毒數(shù)量和毒力的一個重要指標。病毒滴度測定是指確定給定樣品中病毒顆粒的濃度的過程。它是評估病毒產(chǎn)品，如疫苗、基因治療載體或診斷試劑的質(zhì)量和效力的一個重要參數(shù)。病毒滴度檢測方法比較病毒滴度的測定方法有多種，主要分為物理方法和生物方法兩大類。物理方法是通過測定病毒顆粒的大小、形態(tài)、數(shù)量、電荷、光學性質(zhì)等，來推
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CUT&Tag優(yōu)于ChIP-Seq的關鍵竟是它？前面幾期，小翌介紹過“翌圣轉(zhuǎn)座酶系列產(chǎn)品助力NGS文庫構建”（戳鏈接了解詳情）。本期，小翌重點聊聊pG-Tn5。什么是pG-Tn5pG-Tn5(pG-Tn5Transposase)是將ProteinG(pG)與經(jīng)過改造的Tn5轉(zhuǎn)座酶進行融合，形成的同時具備轉(zhuǎn)座酶與ProteinG活性的新型融合酶。ProteinG能特異性與抗體結合，從而使得pG-Tn5具備更高的靶向性。Tn5是一種細菌轉(zhuǎn)座子,經(jīng)改造的Tn5能夠高效地切割DNA,同時連接上特定的接頭
