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四大因素,從源頭解析Duplication導(dǎo)語(yǔ):測(cè)序技術(shù)面世至今發(fā)生了諸多的技術(shù)革新,經(jīng)歷了sanger測(cè)序?yàn)榇淼牡凇鷾y(cè)序、高通量為代表的第二代測(cè)序和單分子實(shí)時(shí)測(cè)序?yàn)榇淼牡谌鷾y(cè)序。迄今為止,高通量測(cè)序(nextgenerationsequencingNGS)技術(shù)日趨成熟,正式進(jìn)入臨床疾病診療階段,與我們生活息息相關(guān)。Dup背景解讀高通量測(cè)序檢驗(yàn)流程可分為“實(shí)驗(yàn)室操作”(又稱為“濕實(shí)驗(yàn)”)和“生物信息學(xué)分析”(又稱“干實(shí)驗(yàn)”)兩部分。對(duì)應(yīng)的實(shí)驗(yàn)操作部分,可點(diǎn)擊高通量建庫(kù)了解。生物信息學(xué)主要
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NGS在病原微生物檢測(cè)中的應(yīng)用背景相關(guān)由病原微生物引起的感染性疾病是臨床面臨的常見的疾病之一,并且隨著人群結(jié)構(gòu)變化、環(huán)境污染以及藥物濫用等因素的影響,病原體呈現(xiàn)多樣化和復(fù)雜化的趨勢(shì),逐步威脅人類健康。隨著測(cè)序技術(shù)的飛速發(fā)展,NGS已逐步應(yīng)用于感染性疾病的診斷、治療和監(jiān)測(cè),在病原微生物鑒定、分型、耐藥突變檢測(cè)及新型病原體鑒定方面有其*的優(yōu)勢(shì)。病原微生物檢測(cè)現(xiàn)狀快速準(zhǔn)確的診斷可以對(duì)病情進(jìn)行監(jiān)控,提供有效治療,控制疾病的蔓延。目前常用的病原微生物分子檢測(cè)方法主要有:PCR技術(shù)(包括常規(guī)PCR以及qPC
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RT-qPCR需要注意的那些事,你都了解嗎?在RT-qPCR實(shí)驗(yàn)中不論是實(shí)驗(yàn)小白還是老司機(jī),都會(huì)遇到各種不同的實(shí)驗(yàn)問(wèn)題。解決問(wèn)題不僅要浪費(fèi)額外的樣品和試劑,還要占用大量的時(shí)間一遍遍的重復(fù)和分析,真是被實(shí)驗(yàn)折磨得焦頭爛額。那實(shí)驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)該注意哪些細(xì)節(jié)呢?小翊精心為大家總結(jié)了RT-qPCR實(shí)驗(yàn)的注意事項(xiàng),希望助小伙伴們一臂之力。RT-qPCR實(shí)驗(yàn)包括RNA提取與質(zhì)量評(píng)估,逆轉(zhuǎn)錄和qPCR三大步驟,每個(gè)步驟都有很多注意事項(xiàng),才能做出可靠的數(shù)據(jù)。下面由小翊給您詳細(xì)介紹。RNA質(zhì)量評(píng)估在RT-qPCR實(shí)驗(yàn)
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膠原酶——?jiǎng)游锝M織消化利器圖1:膠原酶產(chǎn)品介紹膠原酶(Collagenase)是一類能夠特異性的識(shí)別Pro-X-Gly-Pro序列(該序列高頻率出現(xiàn)在膠原中,很少發(fā)現(xiàn)于其他蛋白中),并切割該序列中的中性氨基酸(X)和甘氨酸(Gly)之間的肽鍵的肽鏈內(nèi)切酶,且能夠水解結(jié)締組織中的膠原蛋白。許多蛋白酶都能水解單鏈和變性的膠原多肽,但膠原酶是唯——種可以降解具有三股超螺旋結(jié)構(gòu)的天然膠原纖維的蛋白酶,其廣泛存在結(jié)締組織內(nèi),其中有效的膠原酶是由厭氧細(xì)菌溶組織梭菌(Clostridiumhistolytic
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如何完成一次又經(jīng)濟(jì)的Tunel檢測(cè)
如何完成一次又經(jīng)濟(jì)的Tunel檢測(cè)?——YeasenTUNELdetectionKit讓“美”原位呈現(xiàn)通過(guò)TdT轉(zhuǎn)移酶將Fluorescein-dUTP結(jié)合到有缺口的DNA上是檢測(cè)細(xì)胞凋亡的常用方法之一,如Roche提供的InSituCellDeathKit正是基于這個(gè)原理。產(chǎn)品中的TdT轉(zhuǎn)移酶活性直接影響到標(biāo)記的效率。翊圣生物立足于酶制劑生產(chǎn),力求開發(fā)以酶制劑為基礎(chǔ)的產(chǎn)品,推出三款熒光素(AlexaFluor640,AlexaFluor488,F(xiàn)ITC)標(biāo)記的Tunel檢測(cè)試劑,在滿足客戶對(duì)產(chǎn) -
細(xì)胞污染全攻略(含防、治妙招)我擦……細(xì)胞又污染了!咋整,快崩潰了!!Whocanhelpme!!!君莫急,小翊來(lái)幫您!專治各種細(xì)胞疑難雜癥,小翊送你完整攻略。攻略一:了解細(xì)胞污染古人云:知己知彼方可百戰(zhàn)百勝,因此了解細(xì)胞污染是非常重要的。常見的污染類型有細(xì)菌污染、真菌污染、支原體污染、原蟲污染、黑膠蟲污染、病毒污染以及非同種細(xì)胞污染。1、細(xì)菌:細(xì)菌在普通倒置顯微鏡高倍鏡下大多可見,根據(jù)感染細(xì)菌種類不同,呈現(xiàn)不同的外形。其培養(yǎng)基一般會(huì)變渾濁、變黃較快,對(duì)細(xì)胞生狀態(tài)影響明顯。圖1:細(xì)胞受到細(xì)菌污染
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Clodronate Liposomes體內(nèi)巨噬細(xì)胞清除利器
ClodronateLiposomes體內(nèi)巨噬細(xì)胞清除利器-、迅捷、持久——、迅捷、持久去除巨噬細(xì)胞(depletionofmacrophages)是研究巨噬細(xì)胞功能的重要方法。荷蘭阿姆斯特丹VrijeUniversity的NicovanRooijen教授開發(fā)的一款ClodronateLiposomes,可以利用巨噬細(xì)胞的內(nèi)吞機(jī)制,將膜不通透性的氯磷酸(clodronate)帶入細(xì)胞內(nèi),氯磷酸被釋放,當(dāng)達(dá)到一定的濃度時(shí)可引發(fā)巨噬細(xì)胞的凋亡,從而達(dá)到去除巨噬細(xì)胞的目的。作用原理兩親性磷脂分子在水中 -
qPCR常見問(wèn)題及解決方案對(duì)于從事分子生物學(xué)研究的實(shí)驗(yàn)猿來(lái)說(shuō),RT-qPCR實(shí)驗(yàn)可謂是老生常談了。看似風(fēng)平浪靜,只需“RNA提取-反轉(zhuǎn)錄-熒光定量”這些按部就班的操作,實(shí)則險(xiǎn)象環(huán)生,一丁點(diǎn)的出錯(cuò)都有可能讓我們懷疑人生。即便如此,在CNS的召喚下我們?nèi)耘f一遍遍的重復(fù)、重復(fù)、再重復(fù)。小翊深有體會(huì),為此嘔心瀝血整理出來(lái)常用的SYBRGreen染料法RT-qPCR實(shí)驗(yàn)的幾個(gè)常見問(wèn)題,并給出了可能的原因和解決方案,希望大家能夠順利度過(guò)RT-qPCR大關(guān)。RT-qPCR實(shí)驗(yàn)中,大家或多或少會(huì)遇到擴(kuò)增曲線異常