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克隆技術，又稱為“生物放大技術"，目前應用泛的技術為“分子克隆"，即通過重組技術將目的DNA片段按照人們的設計定向連接起來，在特定的受體細胞中與載體同時復制并得到表達，產生新的遺傳性狀的技術。
大部分的分子克隆方法，諸如傳統分子克隆、TA克隆、Gatway克隆、TOPO克隆、無縫克隆等都繞不開目的片段制備、載體制備、連接、轉化、篩選等等步驟。其中，轉化是分子克隆的關鍵步驟，其目的是產生重組DNA質粒的多個拷貝。接下來小翌就具體解析一下重組質粒轉化至宿主細胞的過程，為您的實驗提供好方法。
轉化是細菌細胞低頻率吸收外界DNA的自然過程，在分子生物學實驗中，用于在專門為吸收DNA而制備的“感受態"細菌內增殖質粒。在轉化過程中，質粒DNA被引入到適當的菌株中，以便菌株可以復制目標序列，用于后續進一步的分析或操作。轉化通常包括化學轉化法和電轉化法。
化學轉化法（CaCl2）
①質粒DNA進入細胞；
②細胞恢復；
③細胞接種培養。
表1.感受態菌株的選擇
菌株 | 特點 | 用途 |
DH5α | 一種常用于質粒克隆的菌株。缺失核酸內切酶（endA），提高了質粒DNA的產量和質量；重組酶缺陷型（recA）減少插入片段的同源重組率，保證了插入DNA的穩定性；lacZΔM15的存在使得DH5α可用于藍白斑篩選。 | 構建克隆， 質粒提取， 藍白斑篩選 |
生長速度快（比DH5α快），10小時可見克隆，recA1和endA1的突變有利于插入DNA的穩定和高純度質粒DNA的提取。 | 構建克隆， 質粒提取， 藍白斑篩選 | |
BL21(DE3) | 用于以T7 RNA聚合酶為表達系統的高效蛋白表達宿主，可同時表達T7 RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶，用于pET系列，pGEX、pMAL等質粒的蛋白表達。 | 非毒性蛋白的表達 |
圖1. 翌圣、DH5α和BL21三種感受態不同批次的轉化效率穩定
圖2.感受態轉化流程
電擊法
PEG介導法
根癌農桿菌介導法
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產品定位 | 產品名稱 | 產品貨號 | 規格 |
快速感受態細胞 | DH5α Fast Chemically Competent Cell F DH5α化學感受態 | 11803ES80 | 10×100 μL |
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常規感受態細胞 | DH5α Chemically Competent Cell DH5α 化學感受態細胞 | 11802ES80 | 10×100 μL |
常規感受態細胞 | BL21(DE3) Chemically Competent Cell BL21(DE3)化學感受態細胞 | 11804ES80 | 10×100 μL |
