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K1人乳頭狀甲狀腺癌細胞株培養(yǎng)說明書

時間:2015-11-2閱讀:2301

                          K1人乳頭狀甲狀腺癌細胞株培養(yǎng)說明書

細胞特性

1)來源:甲狀腺癌

2)形態(tài):上皮細胞樣

3)含量:>1x106 /mL

4)污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

5)規(guī)格:T75瓶或者1mL凍存管包裝

運輸和保存:使用含有胎牛血清的2ml凍存管發(fā)送存活細胞。收到細胞后,可在1000RPM,常溫條件下,離心5min后,于潔凈操作臺棄去上清,加入推薦使用的培養(yǎng)基后轉(zhuǎn)移至10cm培養(yǎng)皿或者T75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時,再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。


細胞培養(yǎng)步驟

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:

1.準備DMEM/F12培養(yǎng)基(DMEM/F12:GIBCO,貨號10565-018),90%;胎牛血清,10%。

2.培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%

3.凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。

細胞處理:

1)復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)隔夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?/span>10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)隔夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3. 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細胞懸液按1215的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進行凍存。


注意事項:

1. 收到細胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們。

2. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。






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