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上海慧穎生物科技有限公司

淺談RAW264.7細胞單核巨噬細胞培養(yǎng)

時間:2015-10-27閱讀:12045

RAW264.7細胞單核巨噬細胞 是一種常規(guī)細胞,在細胞庫中常見,是一株普通細胞,但卻是一種比較難養(yǎng)的細胞,下面就RAW264.7細胞單核巨噬細胞,以下簡稱“RAW264.7細胞"培養(yǎng)經(jīng)驗和大家一起淺談一下:

首先選擇RAW264.7細胞的培養(yǎng)基,培養(yǎng)條件:1640培養(yǎng)液+Serana胎牛血清FBS 10%(素爾生物*代理)。PH:2gNaHCO3每1L 1640培養(yǎng)液。

在我公司培養(yǎng)的過程中,從來沒有用過胰酶消化傳代。一直是直接用彎嘴滴管吹打的。只要按照順序一片片地吹打,很容易就能夠把該細胞吹打下來。吹打一遍之后,置鏡下觀察哪里還有未吹下的細胞,再著重吹打。吹打過程中,注意用力,要比常規(guī)稍加力度以能夠吹下細胞。當(dāng)然,用胰酶消化也是可以的,但是細胞的生長狀態(tài)就是沒有不用直接吹打下來的好。

對于RAW264.7細胞,他的生長時喜歡扎堆的。正常的生長狀態(tài)應(yīng)該是一小片一小片地生長。片片之間不連接,等到長的更多更密的時候就會連成大片,并且會疊加成層。所以,要很好地控制好細胞的生長速度,不要等到疊加成層的時候再傳代。一般,在細胞小片小片地鋪滿瓶底而未連成大片的時候就該傳代了。并且一旦有片細胞疊加成層就要進行傳代。否則該處細胞必老化。影響整體生長狀態(tài)!

該細胞的生長速度比較快,常規(guī)留種下,一般3-4天傳代。有時生長旺盛的時候甚至2天就需要傳代,所以在你傳新瓶的時候,盡量少留種,我們在平時維持的時候,一般都是只在新瓶里用滴管口蘸一下而已。能夠維持4-5天再傳代。如果是一次性大塑料瓶,則可以維持7天左右。過節(jié)假日時可以用此方法維持。

RAW264.7細胞傳代后貼壁時間比較短,半小時就能貼很多,剛貼壁時細胞呈圓形,折光度很好,鏡下觀察明亮如小珍珠狀一個個地散落于瓶底面。生長一段時間后,部分細胞會變?yōu)轭愃扑慕切位蚨噙呅?,伸出偽足之類的吧。這個時候其實就是提示你注意傳代了,這部分細胞如再不傳代,很容易就老化掉。

RAW264.7細胞生長速度非常得快,貼壁速度很快,對生長空間的要求比較敏感。所以傳代的時候以及培養(yǎng)的時候都要注意不要太多的細胞在培養(yǎng)瓶里,這樣細胞狀態(tài)會比較好。很多反而不利于該細胞生長。并且巨噬細胞比較喜歡扎堆生長,而堆與堆之間是有空間的。如果長成相連在一起的一滿片的時候,細胞形態(tài)基本上就會差了,老化的會比較多,對后期實驗結(jié)果是不好的。所以在養(yǎng)細胞的時候應(yīng)該把我好該細胞喜歡的生長空間密度。

對于細胞生長狀態(tài)不好的時候,可以采取“二傳"的方法:

對于有些人總是會遇到養(yǎng)的細胞形態(tài)怎么都不好的問題。這個其實是有一個方法可以改善的。對于貼壁細胞,如果細胞形態(tài)不好,(或者細胞形態(tài)不清晰,表面似有異物等)可以在傳代的時候進行如下操作:

首先,倒掉舊的培養(yǎng)基,加入3ml新的培養(yǎng)基(有無血清的都可)洗滌一次,用滴管吸走,然后再加入3ml的培養(yǎng)基,進行預(yù)吹打,控制吹打力度,輕輕地大概沿著瓶底過一遍,然后吸走。這時侯再開始正式的消化、吹打。(巨噬細胞我們只吹打,不消化的)

其次,把吹打下來的細胞懸液加入到新的培養(yǎng)瓶內(nèi),培養(yǎng)瓶事先加入培養(yǎng)基,放入培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),按時間點觀察細胞貼壁情況。10分鐘觀察一次,20分鐘,30分鐘觀察一次。選擇一個時間點,已經(jīng)有部分細胞貼壁的情況下,重新置于潔凈臺,底面朝上迅速倒出其中的培養(yǎng)基,加入3ml新培養(yǎng)基再輕輕洗一次。然后加入*培養(yǎng)基培養(yǎng)。后續(xù)觀察細胞生長情況以及形態(tài)。我稱之為“二傳"。

如果一次效果還不理想,可重復(fù)多次。直到找到細胞形態(tài)。其中要注意,結(jié)合細胞喜歡的生長情況。喜歡多一點數(shù)量長得好的細胞你就等貼壁細胞比較多點的時候再傳。反之亦然。

RAW264.7細胞本身就會呈不規(guī)則狀的多邊形,所以當(dāng)細胞呈現(xiàn)這種形狀的時候,不必大驚小怪,在培養(yǎng)瓶里多數(shù)細胞呈現(xiàn)出此種形狀之時,其實就是提示你他的生長狀態(tài)即將趨于不好了,有些老化了,該傳代或者優(yōu)化篩選了。

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