RAW264.7細胞單核巨噬細胞 是一種常規(guī)細胞，在細胞庫中常見，是一株普通細胞，但卻是一種比較難養(yǎng)的細胞，下面就RAW264.7細胞單核巨噬細胞，以下簡稱“RAW264.7細胞"培養(yǎng)經(jīng)驗和大家一起淺談一下：

首先選擇RAW264.7細胞的培養(yǎng)基，培養(yǎng)條件：1640培養(yǎng)液+Serana胎牛血清FBS 10%（素爾生物*代理）。PH：2gNaHCO3每1L 1640培養(yǎng)液。

在我公司培養(yǎng)的過程中，從來沒有用過胰酶消化傳代。一直是直接用彎嘴滴管吹打的。只要按照順序一片片地吹打，很容易就能夠把該細胞吹打下來。吹打一遍之后，置鏡下觀察哪里還有未吹下的細胞，再著重吹打。吹打過程中，注意用力，要比常規(guī)稍加力度以能夠吹下細胞。當(dāng)然，用胰酶消化也是可以的，但是細胞的生長狀態(tài)就是沒有不用直接吹打下來的好。

對于RAW264.7細胞，他的生長時喜歡扎堆的。正常的生長狀態(tài)應(yīng)該是一小片一小片地生長。片片之間不連接，等到長的更多更密的時候就會連成大片，并且會疊加成層。所以，要很好地控制好細胞的生長速度，不要等到疊加成層的時候再傳代。一般，在細胞小片小片地鋪滿瓶底而未連成大片的時候就該傳代了。并且一旦有片細胞疊加成層就要進行傳代。否則該處細胞必老化。影響整體生長狀態(tài)！

該細胞的生長速度比較快，常規(guī)留種下，一般3-4天傳代。有時生長旺盛的時候甚至2天就需要傳代，所以在你傳新瓶的時候，盡量少留種，我們在平時維持的時候，一般都是只在新瓶里用滴管口蘸一下而已。能夠維持4-5天再傳代。如果是一次性大塑料瓶，則可以維持7天左右。過節(jié)假日時可以用此方法維持。

RAW264.7細胞傳代后貼壁時間比較短，半小時就能貼很多，剛貼壁時細胞呈圓形，折光度很好，鏡下觀察明亮如小珍珠狀一個個地散落于瓶底面。生長一段時間后，部分細胞會變?yōu)轭愃扑慕切位蚨噙呅?，伸出偽足之類的吧。這個時候其實就是提示你注意傳代了，這部分細胞如再不傳代，很容易就老化掉。

RAW264.7細胞生長速度非常得快，貼壁速度很快，對生長空間的要求比較敏感。所以傳代的時候以及培養(yǎng)的時候都要注意不要太多的細胞在培養(yǎng)瓶里，這樣細胞狀態(tài)會比較好。很多反而不利于該細胞生長。并且巨噬細胞比較喜歡扎堆生長，而堆與堆之間是有空間的。如果長成相連在一起的一滿片的時候，細胞形態(tài)基本上就會差了，老化的會比較多，對后期實驗結(jié)果是不好的。所以在養(yǎng)細胞的時候應(yīng)該把我好該細胞喜歡的生長空間密度。

對于細胞生長狀態(tài)不好的時候，可以采取“二傳"的方法：

對于有些人總是會遇到養(yǎng)的細胞形態(tài)怎么都不好的問題。這個其實是有一個方法可以改善的。對于貼壁細胞，如果細胞形態(tài)不好，（或者細胞形態(tài)不清晰，表面似有異物等）可以在傳代的時候進行如下操作：

首先，倒掉舊的培養(yǎng)基，加入3ml新的培養(yǎng)基（有無血清的都可）洗滌一次，用滴管吸走，然后再加入3ml的培養(yǎng)基，進行預(yù)吹打，控制吹打力度，輕輕地大概沿著瓶底過一遍，然后吸走。這時侯再開始正式的消化、吹打。（巨噬細胞我們只吹打，不消化的）

其次，把吹打下來的細胞懸液加入到新的培養(yǎng)瓶內(nèi)，培養(yǎng)瓶事先加入培養(yǎng)基，放入培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，按時間點觀察細胞貼壁情況。10分鐘觀察一次，20分鐘，30分鐘觀察一次。選擇一個時間點，已經(jīng)有部分細胞貼壁的情況下，重新置于潔凈臺，底面朝上迅速倒出其中的培養(yǎng)基，加入3ml新培養(yǎng)基再輕輕洗一次。然后加入*培養(yǎng)基培養(yǎng)。后續(xù)觀察細胞生長情況以及形態(tài)。我稱之為“二傳"。

如果一次效果還不理想，可重復(fù)多次。直到找到細胞形態(tài)。其中要注意，結(jié)合細胞喜歡的生長情況。喜歡多一點數(shù)量長得好的細胞你就等貼壁細胞比較多點的時候再傳。反之亦然。

RAW264.7細胞本身就會呈不規(guī)則狀的多邊形，所以當(dāng)細胞呈現(xiàn)這種形狀的時候，不必大驚小怪，在培養(yǎng)瓶里多數(shù)細胞呈現(xiàn)出此種形狀之時，其實就是提示你他的生長狀態(tài)即將趨于不好了，有些老化了，該傳代或者優(yōu)化篩選了。