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上海慧穎生物科技有限公司

植物過氧化物酶(POD)ELISA試劑盒說明書

時間:2014-11-19閱讀:1386

植物過氧化物酶(PODELISA試劑盒使用說明書

藥品名稱:

通用名:過氧化物酶(POD酶聯免疫診斷試劑盒

使用目的:

本試劑盒用于測定組織,細胞及其它相關樣本中過氧化物酶(POD含量。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中過氧化物酶(POD水平。用純化的過氧化物酶(POD抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入過氧化物酶(POD抗原,再與HRP標記的過氧化物酶(POD抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMBHRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的過氧化物酶(POD呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中過氧化物酶(POD抗原濃度。

試劑盒組成

1

25倍濃縮洗滌液

20ml×1

7

終止液

3ml×1

2

酶標試劑

3ml×1

8

標準品(360U/L

0.5ml×1

3

酶標包被板

12孔×4

9

標準品稀釋液

1.5ml×1

4

樣品稀釋液

3ml×1

10

說明書

1

5

顯色劑A

3ml×1

11

封板膜

2 

6

顯色劑B

3ml×1/

12

密封袋

1

標本要求

1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融

2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

操作步驟

1.         標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔10孔,在*、第二孔中分別加標準品100μl,然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為240 U/L160 U/L 80 U/L40U/L 20 U/L)。

2.         加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

3.         溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  

4.         配液:將25倍濃縮洗滌液用蒸餾水25倍稀釋后備用

5.         洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

6.         加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

7.         溫育:操作同3

8.         洗滌:操作同5

9.         顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

10.     終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

11.     測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

 

計算

  以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。

注意事項

1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。

4  請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔的*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(×n×5)。

5  封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物請避光保存。

7.試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9.本試劑不同批號組分不得混用。

10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。

檢測范圍:

10U/L-300U/L

規格:

48人份/

保存條件及有效期

1.試劑盒保存:2-8

2.有效期:6個月

 

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